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即用型易錯(cuò)PCR試劑盒

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

即用型易錯(cuò)PCR試劑盒易錯(cuò)PCR（error-prone PCR）是利用Taq DNA多聚酶不具有3′→5′校對(duì)功能的特性，在一定條件下（如不同的dNTP濃度、Mg濃度和MnCl2存在）能夠按較高的機(jī)率引入隨機(jī)引入突變。如果有適當(dāng)?shù)倪x擇方法，則可從構(gòu)建的突變庫(kù)選出所需突變體。本產(chǎn)品就是專門為廣大的研究工作者進(jìn)行易錯(cuò)PCR而開發(fā)，本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn)：

詳細(xì)介紹

即用型易錯(cuò)PCR試劑盒

名稱	規(guī)格	價(jià)格	手冊(cè)
即用型易錯(cuò)PCR試劑盒	100次	1390元

易錯(cuò)PCR（error-prone PCR）是利用Taq DNA多聚酶不具有3′→5′校對(duì)功能的特性，在一定條件下（如不同的dNTP濃度、Mg濃度和MnCl2存在）能夠按較高的機(jī)率引入隨機(jī)引入突變。如果有適當(dāng)?shù)倪x擇方法，則可從構(gòu)建的突變庫(kù)選出所需突變體。本產(chǎn)品就是專門為廣大的研究工作者進(jìn)行易錯(cuò)PCR而開發(fā)，本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn)：

1. 即開即用，十分簡(jiǎn)單方便，尤其在生物制藥和酶學(xué)研究領(lǐng)域顯示出了它的*性。

2. 配方經(jīng)過精心優(yōu)化，突變率穩(wěn)定，突變沒有趨向性。易錯(cuò)PCR的突變率為0.66%（±0.13%），詳見使用手冊(cè)疑難解答。

3. 比體內(nèi)基因突變更快捷簡(jiǎn)單，但如果在PCR引物中設(shè)計(jì)位點(diǎn)，則可使產(chǎn)物克隆到表達(dá)載體，也可以用于體內(nèi)蛋白活性的篩選。

4. 可用于連續(xù)易錯(cuò)PCR（sequential error-prone PCR），只需把上一次易錯(cuò)PCR的產(chǎn)物用作下一次易錯(cuò)PCR的模板即可，使每一次獲得的小突變累積而產(chǎn)生重要的有益突變。

RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時(shí)，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相，離心后可形成水相層和有機(jī)層，這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA，有機(jī)層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴(kuò)增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測(cè)定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴(kuò)增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價(jià)閉合環(huán)狀的兩條互補(bǔ)鏈不會(huì)*分離，當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時(shí)，變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來的構(gòu)型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，通過離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來而被除去。
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