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上海聯(lián)邁生物工程有限公司
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更新時間:2018-06-13 11:52:27瀏覽次數(shù):322次
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Denhardt溶液,50×(同位素用)本產品(A型)是較經典的、用于核酸膜雜交時降低膜對標記探針的非特異結合的試劑,早在Sorthern雜交出現(xiàn)*年由Denhrdt發(fā)明,該產品可用于Southern雜交(含單拷貝基因)、Northern雜交、非同位素雜交(B型規(guī)格),與硝酸纖維素膜、尼龍膜等何種常用的核酸雜交介質兼容。
Denhardt溶液,50×(同位素用)
名稱 | 規(guī)格 | 價格 | 手冊 |
Denhardt溶液,50×(同位素用) | 100mL | 詢價 |
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本產品(A型)是經典的、用于核酸膜雜交時降低膜對標記探針的非特異結合的試劑,早在Sorthern雜交出現(xiàn)*年由Denhrdt發(fā)明,Denhardt溶液,50×(同位素用)該產品可用于Southern雜交(含單拷貝基因)、Northern雜交、非同位素雜交(B型規(guī)格),與硝酸纖維素膜、尼龍膜等何種常用的核酸雜交介質兼容。
RNA提取法:試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚,其中異硫氰酸胍可裂解細胞,促使核蛋白體的解離,使RNA與蛋白質分離,并將RNA釋放到溶液中。當加入氯時,它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA進入水相,Denhardt溶液,50×(同位素用)離心后可形成水相層和有機層,這樣RNA與仍留在有機相中的蛋白質和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA,有機層(黃色)主要為DNA和蛋白質。
實驗步驟:
1、RNA的提取;
2、反轉錄合成cDNA;
3、PCR擴增;
4、產物的電泳和結果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈式擴增(PCR)相結合的技術。首先經反轉錄酶的作用從RNA合成 cDNA,再以cDNA為模板,擴增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進行。在兩步法RT-PCR中,每一步都在zui條件下進行。
堿變性提取質粒DNA是基于染色體DNA與質粒DNA的變性與復性的差異而達到分離目的。在pH高達12.6的堿性條件下,染色體DNA的氫鍵斷裂,雙螺旋結構解開而變性。質粒DNA的大部分氫鍵也斷裂,但超螺旋共價閉合環(huán)狀的兩條互補鏈不會*分離,當以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調節(jié)其pH至中性時,變性的質粒DNA又恢復原來的構型,保存在溶液中,而染色體DNA不能復性而形成纏連的網狀結構,通過離心,染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質-SDS復合物等一起沉淀下來而被除去。
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