DNA 5’末端標記試劑盒

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產品簡介

DNA 5’末端標記試劑盒本產品為DNA 5’末端標記系統(tǒng)，使用T4 Polynucleotide Kinase （T4 多聚核苷酸激酶）和 [γ-32P]ATP 對雙鏈和單鏈DNA 以及RNA 進行磷酸化反應。本產品具有下列特點：
1. 本系統(tǒng)包括酶、緩沖液和用于測試反應效率的對照DNA 標準物。另外還含有 Calf Intestinal Alkaline Phosphatase

詳細介紹

DNA 5’末端標記試劑盒

名稱	規(guī)格	價格	手冊
DNA 5’末端標記試劑盒	10次	996元

本產品為DNA 5’末端標記系統(tǒng)，使用T4 Polynucleotide Kinase (T4 多聚核苷酸激酶)和 [γ-32P]ATP 對雙鏈和單鏈DNA 以及RNA 進行磷酸化反應。本產品具有下列特點：

1. 本系統(tǒng)包括酶、緩沖液和用于測試反應效率的對照DNA 標準物。另外還含有 Calf Intestinal Alkaline Phosphatase DNA 5’末端標記試劑盒( 小牛腸堿性磷酸酶)，與T4 多聚核苷酸激酶) 一起能去除標記物前的5’- 磷酸。

2. 標記適用范圍廣，能用于標記單、雙鏈DNA 和RNA。

3. 操作靈活、方便，可以使用[γ -32P]ATP、[γ -33P]ATP 或者 [γ -35S]ATP。

RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質分離，并將RNA釋放到溶液中。當加入氯時，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進入水相，DNA 5’末端標記試劑盒離心后可形成水相層和有機層，這樣RNA與仍留在有機相中的蛋白質和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA，有機層(黃色)主要為DNA和蛋白質。
實驗步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉錄合成cDNA;
3、PCR擴增;
4、產物的電泳和結果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈式擴增(PCR)相結合的技術。首先經反轉錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進行。
堿變性提取質粒DNA是基于染色體DNA與質粒DNA的變性與復性的差異而達到分離目的。在pH高達12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結構解開而變性。質粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價閉合環(huán)狀的兩條互補鏈不會*分離，當以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調節(jié)其pH至中性時，變性的質粒DNA又恢復原來的構型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復性而形成纏連的網狀結構，通過離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質-SDS復合物等一起沉淀下來而被除去。
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