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上海聯(lián)邁生物工程有限公司
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電泳級(jí)溴酚藍(lán)溶液溴酚藍(lán)分子式為C19H10Br4O5S,分子量為669.97,CAS號(hào)為115-39-9。易溶于氫氧化鈉溶液,溶于甲醇、乙醇和苯酚,是一種pH 指示劑,在pH 3.0 (黃)~4.6(藍(lán)紫)范圍,顏色由黃變藍(lán)。本產(chǎn)是溴酚藍(lán)的1%水溶液,用作制備常用做電泳指示染料,其泳動(dòng)率在0.5-1.4%瓊脂糖中,相當(dāng)于300 bp dsDNA,在8% PAGE變性膠中相當(dāng)于20 bp dsDNA
電泳級(jí)溴酚藍(lán)溶液
名稱(chēng) | 規(guī)格 | 價(jià)格 | 手冊(cè) |
電泳級(jí)溴酚藍(lán)溶液 | 10mL | 120元 |
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溴酚藍(lán)分子式為C19H10Br4O5S,分子量為669.97,CAS號(hào)為115-39-9。易溶于氫氧化鈉溶液,溶于甲醇、乙醇和苯酚,是一種pH 指示劑,在pH 3.0 (黃)~4.6(藍(lán)紫)范圍,顏色由黃變藍(lán)。本產(chǎn)是溴酚藍(lán)的1%水溶液,用作制備常用做電泳指示染料,其泳動(dòng)率在0.5-1.4%瓊脂糖中,相當(dāng)于300 bp dsDNA,在8% PAGE變性膠中相當(dāng)于20 bp dsDNA。如果含溴酚藍(lán)的上樣液跟樣品混合后變黃,則表示樣品中酸性物質(zhì)沒(méi)去除干凈,必須用1M Tris pH8.8調(diào)到溴酚藍(lán)呈藍(lán)色,否則蛋白將向相反方向移動(dòng)。
RNA提取法:試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚,其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞,促使核蛋白體的解離,使RNA與蛋白質(zhì)分離,并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時(shí),它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相,離心后可形成水相層和有機(jī)層,這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開(kāi)。水相層(無(wú)色)主要為RNA,有機(jī)層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)步驟:
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴(kuò)增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測(cè)定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA,再以cDNA為模板,擴(kuò)增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中,每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下,染色體DNA的氫鍵斷裂,雙螺旋結(jié)構(gòu)解開(kāi)而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂,但超螺旋共價(jià)閉合環(huán)狀的兩條互補(bǔ)鏈不會(huì)*分離,當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時(shí),變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來(lái)的構(gòu)型,保存在溶液中,而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),通過(guò)離心,染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來(lái)而被除去。
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