
iCell-0010豬骨骼肌細(xì)胞永生化
英文名稱:
規(guī)格:1*10 6
細(xì)胞介紹
一、細(xì)胞特性
二、細(xì)胞收到后處理
iCell-0010豬骨骼肌細(xì)胞永生化在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿*培養(yǎng)液并封好瓶口是細(xì)胞運(yùn)輸?shù)霓k法。收到細(xì)胞回到自己的實(shí)驗(yàn)室后,先打開外包裝,用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內(nèi),嚴(yán)格無菌操作。鏡下觀察:未超過80%匯合度時(shí),可將瓶裝的*培養(yǎng)液移入廢液缸中,原瓶(T25瓶)保留6-8ml*培養(yǎng)液,懸浮細(xì)胞需離心處理,放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng);超過80%匯合度時(shí),根據(jù)情況傳代或者凍存,具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。
三、細(xì)胞培養(yǎng)步驟
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中,加入約6ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1、對于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
2、對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集,1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細(xì)胞懸起,將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,進(jìn)行離心收集,1000RPM條件下離心5分鐘,去除上清,按凍存數(shù)量加入血清及DMSO,凍存比例為90%FBS+10%DMSO。
出現(xiàn)問題,可重發(fā)的情況有哪些?判定標(biāo)準(zhǔn)是什么?
(1)細(xì)胞運(yùn)輸途中遭遇的各種問題,細(xì)胞丟失、破損、漏液等,重發(fā);
- 凍存的細(xì)胞復(fù)蘇后,絕大多數(shù)細(xì)胞未存活,重發(fā);
- 存活的細(xì)胞靜置24小時(shí)后,絕大多數(shù)細(xì)胞未存活,重發(fā);
- 凍存的細(xì)胞復(fù)蘇后或存活的細(xì)胞靜置4小時(shí)后并且未開封,出現(xiàn)污染,重發(fā);
- 視具體情況而定。
★ 注:如運(yùn)輸過程中導(dǎo)致細(xì)胞污染或者死亡,我們將無條件補(bǔ)發(fā) 收貨后十個工作日內(nèi)有其他問題提供照片可半價(jià)重發(fā)。
相關(guān)細(xì)胞系列表:
肺動脈平滑肌細(xì)胞 大鼠源 1×10^6 細(xì)胞數(shù)/ml A498細(xì)胞
肺動脈平滑肌細(xì)胞 小鼠源 1×10^6 細(xì)胞數(shù)/ml BT-20細(xì)胞
II型肺泡上皮細(xì)胞 小鼠源 1×10^6 細(xì)胞數(shù)/ml BT-474細(xì)胞
主動脈平滑肌細(xì)胞 小鼠源 1×10^6 細(xì)胞數(shù)/ml BT-549細(xì)胞
骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSC) 小鼠源 1×10^6 細(xì)胞數(shù)/ml Bxpc-3細(xì)胞
骨髓內(nèi)皮祖細(xì)胞(EPC) 小鼠源 1×10^6 細(xì)胞數(shù)/ml C-33A細(xì)胞
脂肪干細(xì)胞 小鼠源 1×10^6 細(xì)胞數(shù)/ml C8166細(xì)胞
腎小管上皮細(xì)胞 小鼠源 1×10^6 細(xì)胞數(shù)/ml Ca ski細(xì)胞
胚胎成纖維細(xì)胞 小鼠源 1×10^6 細(xì)胞數(shù)/ml CA46細(xì)胞
皮膚成纖維細(xì)胞 小鼠源 1×10^6 細(xì)胞數(shù)/ml Caco-2細(xì)胞
心肌細(xì)胞 小鼠源 1×10^6 細(xì)胞數(shù)/ml Caki-1細(xì)胞
外周血樹突狀細(xì)胞 小鼠源 1×10^6 細(xì)胞數(shù)/ml Caki-2細(xì)胞
外周血自然殺傷細(xì)胞 小鼠源 1×10^6 細(xì)胞數(shù)/ml Cal-27細(xì)胞
人腎上皮細(xì)胞 293 人源 1×10^6 細(xì)胞數(shù)/ml CAL-62細(xì)胞