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上海聯(lián)邁生物工程有限公司
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所 在 地上海市
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更新時間：2018-05-24 12:36:28瀏覽次數(shù)：323次
聯(lián)系我時，請告知來自 環(huán)保在線HFOB1.19人 SV40 轉(zhuǎn)染成骨細(xì)胞（STR鑒定）在0.6mg/ml新霉素G418存在下，用溫度敏感的表達載體pUCSVisA58轉(zhuǎn)染自然流產(chǎn)的胎兒四肢組織，建立了此細(xì)胞系。在33.5℃溫度下細(xì)胞分裂很快，而在限制溫度39.5℃下細(xì)胞極少分裂或不分裂。這些細(xì)胞具有分化為表達造骨細(xì)胞表型的成熟造骨細(xì)胞的能力。這些細(xì)胞提供了一個同質(zhì)化的快速增殖模型系統(tǒng)，用于研究正常人
英文名稱：HFOB1.19
HFOB1.19人 SV40 轉(zhuǎn)染成骨細(xì)胞（STR鑒定）
英文名稱：HFOB1.19
規(guī)格：1*10 6
細(xì)胞介紹
在0.6mg/ml新霉素G418存在下，用溫度敏感的表達載體pUCSVisA58轉(zhuǎn)染自然流產(chǎn)的胎兒四肢組織，建立了此細(xì)胞系。在33.5℃溫度下細(xì)胞分裂很快，而在限制溫度39.5℃下細(xì)胞極少分裂或不分裂。這些細(xì)胞具有分化為表達造骨細(xì)胞表型的成熟造骨細(xì)胞的能力。這些細(xì)胞提供了一個同質(zhì)化的快速增殖模型系統(tǒng)，用于研究正常人造骨細(xì)胞的分化，造骨細(xì)胞生理和激素，生長因子，和對造骨細(xì)胞的功能及分化有影響的細(xì)胞因子。
一、細(xì)胞特性
1） 來源：成骨細(xì)胞
2） 形態(tài)：貼壁生長
3） 含量：>1x106 個/mL
4） 污染：支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測為陰性
5） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝
二、細(xì)胞收到后處理
HFOB1.19人 SV40 轉(zhuǎn)染成骨細(xì)胞（STR鑒定）在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿*培養(yǎng)液并封好瓶口是細(xì)胞運輸?shù)霓k法。收到細(xì)胞回到自己的實驗室后，先打開外包裝，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作。鏡下觀察：未超過80%匯合度時，可將瓶裝的*培養(yǎng)液移入廢液缸中，原瓶（T25瓶）保留6-8ml*培養(yǎng)液，懸浮細(xì)胞需離心處理，放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)；超過80%匯合度時，根據(jù)情況傳代或者凍存，具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。
三、細(xì)胞培養(yǎng)步驟
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中，加入約6ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）傳代：如果細(xì)胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
1、對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
2、對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集，1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，進行離心收集，1000RPM條件下離心5分鐘，去除上清，按凍存數(shù)量加入血清及DMSO，凍存比例為90%FBS+10%DMSO。
出現(xiàn)問題，可重發(fā)的情況有哪些？判定標(biāo)準(zhǔn)是什么？
（1）細(xì)胞運輸途中遭遇的各種問題，細(xì)胞丟失、破損、漏液等，重發(fā)；
★ 注：如運輸過程中導(dǎo)致細(xì)胞污染或者死亡，我們將無條件補發(fā) 收貨后十個工作日內(nèi)有其他問題提供照片可半價重發(fā)。
相關(guān)細(xì)胞系列表：
人外周血淋巴細(xì)胞系；U266B1 人源 1×10^6 細(xì)胞數(shù)/ml
人細(xì)胞；Hela229[HeLa229] 人源 1×10^6 細(xì)胞數(shù)/ml
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人胚腎細(xì)胞-F克隆；293F 人源 1×10^6 細(xì)胞數(shù)/ml
豬腎傳代細(xì)胞；IBRS-2 豬源 1×10^6 細(xì)胞數(shù)/ml
抗鼠CD8單克隆細(xì)胞；YTS169.4.2.1 1×10^6 細(xì)胞數(shù)/ml
人肺癌細(xì)胞/5Fu耐藥株；A549-5Fu 人源 1×10^6 細(xì)胞數(shù)/ml
小鼠結(jié)締組織L細(xì)胞株929克??；L-929[L929] 小鼠源 1×10^6 細(xì)胞數(shù)/ml
抗鼠CD4單克隆細(xì)胞；YTA3.1.2 1×10^6 細(xì)胞數(shù)/ml
小鼠樹突狀細(xì)胞肉瘤低轉(zhuǎn)移細(xì)胞（綠色熒光蛋白標(biāo)記）；DG6-GFP 小鼠源 1×10^6 細(xì)胞數(shù)/ml
小鼠肺腺癌低轉(zhuǎn)移細(xì)胞（綠色熒光蛋白標(biāo)記）；LA1-GFP 小鼠源 1×10^6 細(xì)胞數(shù)/ml
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