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上海聯(lián)邁生物工程有限公司
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更新時間：2018-05-24 12:32:39瀏覽次數(shù)：428次
聯(lián)系我時，請告知來自 環(huán)保在線A375-EGFP人惡性黑色素瘤細胞（STR鑒定）A375源自一位54歲女性，是Giard DJ等人建立的一系列細胞株中的一株。該細胞可在免疫抑制小鼠上成瘤，在瓊脂上形成克隆。
A375-EGFP是在 A375細胞上用慢病毒標(biāo)記上EGFP，可以顯示綠色熒光，帶有嘌呤霉素抗性。
英文名稱：Human Malignant Melanoma Cells
1） 來源：人黑色素瘤
2） 形態(tài)：上皮細胞樣，
A375-EGFP人惡性黑色素瘤細胞（STR鑒定）
英文名稱：Human Malignant Melanoma Cells
規(guī)格：1*10 6
細胞介紹
A375源自一位54歲女性，是Giard DJ等人建立的一系列細胞株中的一株。該細胞可在免疫抑制小鼠上成瘤，在瓊脂上形成克隆。
A375-EGFP是在 A375細胞上用慢病毒標(biāo)記上EGFP，可以顯示綠色熒光，帶有嘌呤霉素抗性。
一、細胞特性
1） 來源：人黑色素瘤
2） 形態(tài)：上皮細胞樣，貼壁生長
3） 含量：>1x106 個/mL
4） 污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝
二、細胞收到后處理
A375-EGFP人惡性黑色素瘤細胞（STR鑒定）在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿*培養(yǎng)液并封好瓶口是細胞運輸?shù)霓k法。收到細胞回到自己的實驗室后，先打開外包裝，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作。鏡下觀察：未超過80%匯合度時，可將瓶裝的*培養(yǎng)液移入廢液缸中，原瓶（T25瓶）保留6-8ml*培養(yǎng)液，懸浮細胞需離心處理，放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)；超過80%匯合度時，根據(jù)情況傳代或者凍存，具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。
三、細胞培養(yǎng)步驟
1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?cm皿中，加入約6ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2）傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
1、對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
2、對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集，1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，進行離心收集，1000RPM條件下離心5分鐘，去除上清，按凍存數(shù)量加入血清及DMSO，凍存比例為90%FBS+10%DMSO。
出現(xiàn)問題，可重發(fā)的情況有哪些？判定標(biāo)準(zhǔn)是什么？
（1）細胞運輸途中遭遇的各種問題，細胞丟失、破損、漏液等，重發(fā)；
★ 注：如運輸過程中導(dǎo)致細胞污染或者死亡，我們將無條件補發(fā) 收貨后十個工作日內(nèi)有其他問題提供照片可半價重發(fā)。
相關(guān)細胞系列表：
昆蟲細胞；Hi-five(BTI-TN-5B1-4) 1×10^6 細胞數(shù)/ml
小鼠骨髓纖維原細胞；M2-10B4 小鼠源 1×10^6 細胞數(shù)/ml
人二倍體細胞/人胚肺成纖維細胞；2BS 人 1×10^6 細胞數(shù)/ml
人結(jié)腸腺癌細胞；SW48 人源 1×10^6 細胞數(shù)/ml
人惡性黑色素瘤細胞；A375[A-375] 人源 1×10^6 細胞數(shù)/ml
人皮膚T淋巴瘤細胞；Hut78 人源 1×10^6 細胞數(shù)/ml
大鼠嗜堿性粒細胞性白血病細胞；RBL-1 大鼠源 1×10^6 細胞數(shù)/ml
人肺腺癌細胞；NCI-H441 人源 1×10^6 細胞數(shù)/ml
GFP標(biāo)記的小鼠子細胞；U14-GFP 小鼠源 1×10^6 細胞數(shù)/ml
人胰腺癌細胞；PANC-1 人源 1×10^6 細胞數(shù)/ml
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