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操作流程：
1待測(cè)樣品孔中每孔加入待測(cè)樣品100μl，每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔；設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔，每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl；另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔，加入純細(xì)胞裂解液100μl。
2酶標(biāo)板置4℃，包被過(guò)夜。
3洗板：吸干孔內(nèi)反應(yīng)液，用洗滌液過(guò)洗一遍將洗滌液注滿(mǎn)板孔后，即甩去，之后將洗滌液注滿(mǎn)板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
4陰性對(duì)照孔每孔加入pbs 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人aif抗體工作液50μl。
5酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。
6洗板，同4。
7每孔加1:5000稀釋的hrp-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
8酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。
9洗板，同4。
10每孔加tmb顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
11每孔加100μl 2mol/l h2so4終止反應(yīng)。
12分別測(cè)450nm 吸光值w1和630nm吸光值w2，終測(cè)得的od值為兩者之差w1-w2，以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
13數(shù)據(jù)處理：在得出標(biāo)本s和陰性對(duì)照n的 od值后，計(jì)算s/n值。s/n≥2.1為陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)。

試劑盒組成及試劑配制：
1. 酶聯(lián)板（Assay plate ）：一塊（96孔）。
2. 標(biāo)準(zhǔn)品（Standard）：2瓶（凍干品）。
3. 樣品稀釋液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。
4. 標(biāo)記抗體稀釋液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。
5. 辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。
6. 標(biāo)記抗體（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）
7. 辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）
8. 底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。
9. 濃洗滌液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10. 終止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。
試劑和樣本的控制方法：
一、試劑
1.試劑的選擇：國(guó)家明確要求要采用批批檢定的形式對(duì)ELISA試劑嚴(yán)格把關(guān)，我司嚴(yán)格按照進(jìn)行，已獲得國(guó)家承認(rèn)的“三證"，每一個(gè)產(chǎn)品都有對(duì)應(yīng)的批號(hào)，只要客戶(hù)提前下單，我們就能為您提供新批次的產(chǎn)品，不必?fù)?dān)心會(huì)有過(guò)期的試劑。我司的試劑，值得您選擇。
2.試劑的準(zhǔn)備：先將試劑盒先從冰箱中拿出來(lái)，在室溫下放置20-30 min后，再進(jìn)行測(cè)定，使試劑盒在使用前與室溫平衡，這樣做的目的能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度較快地達(dá)到所需的溫度，以滿(mǎn)足后面的測(cè)定需求。
二、樣本
1.內(nèi)源性干擾因素：包括類(lèi)風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、高濃度的非特異免疫球蛋白、異嗜性抗體、某些自身抗體等；
類(lèi)風(fēng)濕因子的控制方法：
①用F(ab)2替代完整的IgG；
②標(biāo)本用聯(lián)有熱變性IgG的固相吸附劑處理；
③檢測(cè)抗原時(shí)，可用加入到標(biāo)本稀釋液中使RF降解。
ELISA 試驗(yàn)時(shí)，注意事項(xiàng)如下：
1. 正式試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)分別以陽(yáng)性對(duì)照與陰性對(duì)照控制試驗(yàn)條件，待檢樣品應(yīng)作一式二份，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。有時(shí)本底較高，說(shuō)明有非特異性反應(yīng)，可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。
2. 在ELISA中，進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的選擇是很重要的，其中包括:
（1） 固相載體的選擇：許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進(jìn)行篩選：用等量抗原包被，在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng)，觀(guān)察其顯色反應(yīng)是否均一性，據(jù)此判明其吸附性能是否良好。
（2） 包被抗體（或抗原）的選擇：將抗體（或抗原）吸附在固相載體表面時(shí)，要求純度要好,吸附時(shí)一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時(shí)間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18～24小時(shí)。蛋白質(zhì)包被的zui適濃度需進(jìn)行滴定：即用不同的蛋白質(zhì)濃度（0.1、1.0和10μg／ml等）進(jìn)行包被后，在其它試驗(yàn)條件相同時(shí)，觀(guān)察陽(yáng)性標(biāo)本的OD值。選擇OD值zui大而蛋白量zui少的濃度。對(duì)于多數(shù)蛋白質(zhì)來(lái)說(shuō)通常為1～10μg／ml。
（3） 酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇：首先用直接ELISA法進(jìn)行初步效價(jià)的滴定（見(jiàn)酶標(biāo)記抗體部份）。然后再固定其它條件或采取“方陣法"（包被物、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記抗體分別為不同的稀釋度）在正式實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度。
（4） 酶的底物及供氫體的選擇：對(duì)供氫體的選擇要求是價(jià)廉、安全、有明顯地顯色反應(yīng)，而本身無(wú)色。有些供氫體（如OPD等）有潛在的致癌作用，應(yīng)注意防護(hù)。有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是目前較為滿(mǎn)意的供氫體。底物作用一段時(shí)間后，應(yīng)加入強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時(shí)間，以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制，尤其是H2O2在臨用前加入 。
Senkyunolide E  中文名：  分子式：C12H12O3  度：%  兔子球蛋白A(IgA)  

Dihydrosenkyunolide C  中文名：二氫洋川芎內(nèi)酯C  分子式：C12H14O3  度：98.0%  兔子可溶性細(xì)胞粘附分子1(sVCAM-1)  

Glyceryl hexacosanoate  中文名：  分子式：C29H58O4  度：%  兔子可溶性細(xì)胞間粘附分子1(sICAM-1)  

Digalactosyldiacylglycerol  中文名：雙半乳糖二酰甘油  分子式：C49H88O15  度：%  兔子可溶性E選擇素(sE-selectin)              

4-O-(3-nitropropanoyl)corollin  中文名：  分子式：C18H24N4O18  度：%  兔子可溶性血栓調(diào)節(jié)蛋白(sTM)試劑盒
磷脂酶A2激活肽  Phospholipase A2 ActivatingPeptide  質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR 英文名稱(chēng)RatCA125大鼠卵巢癌標(biāo)志物(CA125)

泡蛙肽  Physalaemin  質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR 基質(zhì)金屬(MMP)膠原譜法(collagen-zymography)電泳分析試劑盒(MMP1/13)5

PKI-tide  PKI-tide  質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR SLE人系統(tǒng)性紅斑狼瘡規(guī)格：48T/96T

血小板因子4  Platelet Factor 4 (58-70)(human)  質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR 小鼠肥大細(xì)胞類(lèi)(MCT)試劑盒 ，英文名： MCT

Pneumadin，人  Pneumadin (human)  質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR 大鼠CXC趨化因子受體3(CXCR3)檢測(cè)試劑盒RatCXC-chemokinereceptor3,CXCR3

Pneumadin，大鼠  Pneumadin (rat)  質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR 人白介素2(IL-2)試劑盒 Human IL-2

朊病毒肽（106-126），人  Prion Peptide (106-126),Human  質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR 英文名稱(chēng)MouseTumornecrosisfactorsolublereceptorI小鼠腫瘤壞死因子可溶性受體I(TNFsRI)

前腎上腺髓質(zhì)素（1-20），人  Proadrenomedullin (1-20)(human)  質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR PEPCIN酶解法石蠟切片抗原修復(fù)處理試劑盒50

前腎上腺髓質(zhì)素（45-92），人  Proadrenomedullin (45-92)(human)  質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR Porcinetelomerase,TE試劑盒豬端粒酶(TE)試劑盒

蛋白C（19-31）  Protein Kinase C (19-31)  質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR 小鼠肥大細(xì)胞類(lèi)糜1(CMA1)試劑盒 ，英文名： CMA1
小鼠軸突生長(zhǎng)誘向因子1(Ntn1)elisa檢測(cè)試劑盒
TGF-β3 檢測(cè)試劑盒兔超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)elisa檢測(cè)試劑盒

兔超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)elisa分析檢測(cè)試劑盒

兔叉頭框蛋白P3(FOXP3)elisa檢測(cè)試劑盒

兔叉頭框蛋白P3(FOXP3)elisa分析檢測(cè)試劑盒

兔補(bǔ)體片斷5a(C5a)elisa檢測(cè)試劑盒
注：本公司提供試劑盒免費(fèi)代測(cè)服務(wù)。需要其他Elisa試劑盒請(qǐng)咨詢(xún)銷(xiāo)售人員。產(chǎn)品僅用于科研