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操作流程：
1待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl，每種樣品設(shè)3個平行孔；設(shè)兩個陰性對照孔，每孔加未處理組的細胞裂解液100μl；另設(shè)一個空白對照孔，加入純細胞裂解液100μl。
2酶標板置4℃，包被過夜。
3洗板：吸干孔內(nèi)反應(yīng)液，用洗滌液過洗一遍將洗滌液注滿板孔后，即甩去，之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復洗滌3-4次。
4陰性對照孔每孔加入pbs 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人aif抗體工作液50μl。
5酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。
6洗板，同4。
7每孔加1:5000稀釋的hrp-標記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
8酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。
9洗板，同4。
10每孔加tmb顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
11每孔加100μl 2mol/l h2so4終止反應(yīng)。
12分別測450nm 吸光值w1和630nm吸光值w2，終測得的od值為兩者之差w1-w2，以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
13數(shù)據(jù)處理：在得出標本s和陰性對照n的 od值后，計算s/n值。s/n≥2.1為陽性判定標準。

試劑盒組成及試劑配制：
1. 酶聯(lián)板（Assay plate ）：一塊（96孔）。
2. 標準品（Standard）：2瓶（凍干品）。
3. 樣品稀釋液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。
4. 標記抗體稀釋液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。
5. 辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。
6. 標記抗體（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）
7. 辣根過氧化物酶標記親和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）
8. 底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。
9. 濃洗滌液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10. 終止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。
試劑和樣本的控制方法：
一、試劑
1.試劑的選擇：國家明確要求要采用批批檢定的形式對ELISA試劑嚴格把關(guān)，我司嚴格按照進行，已獲得國家承認的“三證"，每一個產(chǎn)品都有對應(yīng)的批號，只要客戶提前下單，我們就能為您提供新批次的產(chǎn)品，不必擔心會有過期的試劑。我司的試劑，值得您選擇。
2.試劑的準備：先將試劑盒先從冰箱中拿出來，在室溫下放置20-30 min后，再進行測定，使試劑盒在使用前與室溫平衡，這樣做的目的能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度較快地達到所需的溫度，以滿足后面的測定需求。
二、樣本
1.內(nèi)源性干擾因素：包括類風濕因子、補體、高濃度的非特異免疫球蛋白、異嗜性抗體、某些自身抗體等；
類風濕因子的控制方法：
①用F(ab)2替代完整的IgG；
②標本用聯(lián)有熱變性IgG的固相吸附劑處理；
③檢測抗原時，可用加入到標本稀釋液中使RF降解。
ELISA 試驗時，注意事項如下：
1. 正式試驗時，應(yīng)分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件，待檢樣品應(yīng)作一式二份，以保證實驗結(jié)果的準確性。有時本底較高，說明有非特異性反應(yīng)，可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。
2. 在ELISA中，進行各項實驗條件的選擇是很重要的，其中包括:
（1） 固相載體的選擇：許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進行篩選：用等量抗原包被，在同一實驗條件下進行反應(yīng)，觀察其顯色反應(yīng)是否均一性，據(jù)此判明其吸附性能是否良好。
（2） 包被抗體（或抗原）的選擇：將抗體（或抗原）吸附在固相載體表面時，要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18～24小時。蛋白質(zhì)包被的zui適濃度需進行滴定：即用不同的蛋白質(zhì)濃度（0.1、1.0和10μg／ml等）進行包被后，在其它試驗條件相同時，觀察陽性標本的OD值。選擇OD值zui大而蛋白量zui少的濃度。對于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1～10μg／ml。
（3） 酶標記抗體工作濃度的選擇：首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定（見酶標記抗體部份）。然后再固定其它條件或采取“方陣法"（包被物、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度）在正式實驗系統(tǒng)里準確地滴定其工作濃度。
（4） 酶的底物及供氫體的選擇：對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應(yīng)，而本身無色。有些供氫體（如OPD等）有潛在的致癌作用，應(yīng)注意防護。有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后，應(yīng)加入強酸或強堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時間，以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制，尤其是H2O2在臨用前加入 。
Sarafloxacin   91296-87-6  中文名：鹽酸沙拉  分子式：C20H18ClF2N3O3    兔交聯(lián)物(PY)  

Potassium benzylpenicillin  113-98-4  中文名：鉀  分子式：C16H17KN2O4S    兔交聯(lián)物(PY)  

Diaveridine  5355-16-8  中文名：敵菌凈  分子式：C13H16N4O2    兔糖化血紅蛋白A1c(A1c)              

Enrofloxacin  93106-60-6  中文名：恩諾  分子式：C19H22FN3O3    兔補體蛋白3試劑盒   兔補體蛋白3試劑盒   規(guī)格型號：   兔補體蛋白3試劑盒，規(guī)格型號：，來源：試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：兔補體蛋白3試劑盒、兔補體蛋白3 試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

Mequindox  13297-17-1  中文名：乙酰甲喹  分子式：C11H10N2O3    兔半胱酸抑制劑試劑盒   兔半胱酸抑制劑試劑盒   規(guī)格型號：   兔半胱酸抑制劑試劑盒，規(guī)格型號：，來源：試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：兔半胱酸抑制劑試劑盒、兔半胱酸抑制劑試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。
正十三烷基-beta-D-麥牙糖苷(>98%,BC)  n-Tridecyl-b-D-maltopyranoside (e)  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BC 英文名稱MouseTumornecrosisfactorβ小鼠腫瘤壞死因子β(TNFβ)

辛二酸(>98%,BR)  Octanedioic acid  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR pGADT7+目的基因酵母雙雜交獵物

橄欖油  Olive oil  質(zhì)量規(guī)格：商品級 Porcinethrombomodulin,TM試劑盒豬血栓調(diào)節(jié)蛋白(TM)試劑盒

鄰甲氧基肉桂醛(>98%,BR)  o-Methoxycinnamaldehyde  質(zhì)量規(guī)格：>98%，BR 小鼠泛素結(jié)合酶E2A(UBE2A)試劑盒 ，英文名： UBE2A

苔紅素（合成）  Orcein, synthetic  質(zhì)量規(guī)格：BS 人抗原處理相關(guān)轉(zhuǎn)運蛋白(TAP)檢測試劑盒Humananspoerassociatedwithaigenprocessing,TAP

鄰香蘭素(>98%,BR)  o-Vanillin  質(zhì)量規(guī)格：>98%，BR 大鼠受體富含半1型蛋白M130/CD163分子,CD163 試劑盒 Rat scavenger receptor cysteine-rich type 1 protein M130,CD163

草(>98%,BR)  Oxalyldihydrazide  質(zhì)量規(guī)格：>98%，BR 英文名稱RatAEA(IgG，M)大鼠抗內(nèi)膜抗體(AEA)

惡唑(>96%，BC)  Oxazole  質(zhì)量規(guī)格：>96%，BC (KALLIKREIN)活性比色法定量檢測試劑盒20

乙酸鈀  Palladium (II) acetate  質(zhì)量規(guī)格：BC ProGRP人胃泌素釋放肽前體規(guī)格：48T/96T

氯化鈀  Palladium (II) chloride  質(zhì)量規(guī)格：BC 小鼠泛素蛋白(Ub)試劑盒 ，英文名： Ub
小鼠腫瘤特異生長因子/腫瘤相關(guān)因子(TSGF)elisa檢測試劑盒
HDAC4 檢測試劑盒兔(ADR)elisa分析檢測試劑盒

兔γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶1(GGT1)elisa檢測試劑盒

兔γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶1(GGT1)elisa分析檢測試劑盒

兔β內(nèi)啡肽(β-EP)elisa檢測試劑盒

兔β內(nèi)啡肽(β-EP)elisa分析檢測試劑盒
注：本公司提供試劑盒免費代測服務(wù)。需要其他Elisa試劑盒請咨詢銷售人員。產(chǎn)品僅用于科研