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上海邦景實業(yè)有限公司
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更新時間：2023-03-02 09:14:26瀏覽次數(shù)：148
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操作要點：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復(fù)后才能進行后續(xù)的實驗。
商品屬性：
產(chǎn)品名稱：人胃癌細胞：SNU-5
貨號：BJ-X96760
規(guī)格：1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶
分類：細胞系
商品介紹：
名稱 SNU-5 (人胃癌細胞) 年齡（性別） 33歲 組織來源 胃；源自轉(zhuǎn)移部位：腹水 生長特性 懸浮細胞 細胞形態(tài) 上皮細胞樣 背景描述 SNU-5細胞來源于一名低分化胃癌患者的轉(zhuǎn)移性腹水，是于1987年分離建立；SNU-5細胞表達CEA和TAG-72。 生物安全等級 1 生長培養(yǎng)基 IMDM＋20% FBS＋1% P/S 推薦傳代比例 1:3-1:4 推薦換液頻率 2~3次/周 倍增時間 ~34 hours 凍存條件 凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃ 致瘤性 Yes, the cells have a reported colony forming efficiency of 27% in semisolid medium. 受體表達情況 acetylcholine, muscarinic, expressed; vasoactive intestinal peptide (VIP), expressed; vasoactive intestinal peptide (VIP); acetylcholine, muscarinic 抗原表達情況 Blood Type O; Rh+; The cells express the surface glycoproteins carcinoembryonic antigen (CEA) and TAG 72. 保藏機構(gòu) ATCC; CRL-5973 |
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：產(chǎn)品僅用于科研
1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
DNA 電泳分子量標準 (3)λ/EcoR I+ Hind III50 次 氣相 RNase 清除劑120mL
DNA 電泳分子量標準 (3)pBR322/BstN I50 次 葡萄球菌 RNAout50 次
DNA 電泳分子量標準 (3)φX174 DNA/Hae Ⅲ50 次 平滑肌細胞生長因子5mL
DNA 電泳分子量標準 (3)φX174 DNA/Hinc Ⅱ50 次 平滑肌細胞生長因子 ( 不含血清 )5mL
Southern 專用 DNA Marker( )20 次 嘌呤干粉25mg
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