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上海邦景實業(yè)有限公司
主營產(chǎn)品： 進口elisa試劑盒，細胞株，細胞系，菌種 |
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更新時間：2023-01-22 09:06:29瀏覽次數(shù)：210
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操作要點：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉移至準備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。
商品屬性：
產(chǎn)品名稱：人胚腎細胞：2V6.11
貨號：BJ-X96632
規(guī)格：1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶
分類：細胞系
商品介紹：
名稱 2V6.11 (人胚腎細胞) 年齡（性別） 男性，胎兒 組織來源 腎；用腺病毒5(Ad5)DNA轉化；用腺病毒前區(qū)4質粒DNA轉染 生長特性 貼壁細胞 細胞形態(tài) 上皮細胞樣 背景描述 2V6.11細胞是2001年從人胚腎細胞株293 [HEK-293]衍化而來，293 [HEK-293]細胞用攜帶Zeocin-抗性標記的質粒pVgRXR轉染得到293pVgRXR細胞。隨后，用包含編碼E4 24K的Ad5 E4ORF6基因的質粒pEKORF6轉染。pEKORF6從包含潮抗性基因的質粒pIndHydro衍生而來，載體包含SV40病毒序列。2V6.11細胞株初從含潮的培養(yǎng)液中用克隆環(huán)分離單克隆得到。2V6.11細胞誘導表達的人腺病毒E4 34KDa蛋白可通過免疫印跡法檢測；2V6.11細胞可以用作研究腺病毒E4癌基因的工具。 生長培養(yǎng)基 MEM＋10% FBS＋1% P/S 推薦傳代比例 1:2-1:4 推薦換液頻率 2~3次/周 凍存條件 凍存液：55% 基礎培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃ 保藏機構 ATCC; CRL-2784 ATCC; JHU-67 |
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：產(chǎn)品僅用于科研
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
Phorbol12-myristate13-acetate(PKC 激活劑 ) 1mg Ac-DEVD-FMK(Caspase3Inhibitor)20μL
Pifithrin-a(p53 抑制劑 )5mg Ac-DEVD-CHO(Caspase3 抑制劑 )100μL
PMA/TPA (PKC 激活劑 )1mg 96 孔板質粒 DNAout( 真空法 )1次
Rapamycin(FRAP/mTOR 抑制劑 )100μg 96 孔板質粒 DNAout( 離心法 )1次
SB203580(p38MAPK 抑制劑 )1mg 96 孔板血液 DNAout( 真空法 )5次
FITC標記的膜粘連蛋白10抗體
FITC標記的前梯度同源蛋白2
FITC標記的乙醛脫氫酶2抗體
FITC標記的乙醛脫氫酶1型抗體
FITC標記的鐵調節(jié)蛋白2抗體
人胚腎細胞：2V6.11大鼠蛋白激酶C(PKC)elisa檢測試劑盒
大鼠蛋白激酶Cα(PKCα)elisa檢測試劑盒
大鼠蛋白激酶Cα相互作用蛋白1(PICK1)elisa檢測試劑盒
大鼠蛋白激酶Cβ1(PKCβ1)elisa檢測試劑盒
大鼠蛋白激酶Cγ(PKCγ)elisa檢測試劑盒
