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上海邦景實業(yè)有限公司
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人胚腎細胞操作步驟
2020-8-26 閱讀(462)
人胚腎細胞操作步驟：
1. 人胚腎細胞可于白色布景上，直接用肉眼查詢效果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+"、“-"號表示。也可測OD值：在人胚腎細胞儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。
2. 加酶標抗體：于各反應(yīng)孔中，參與新鮮稀釋的酶標抗體（經(jīng)滴定后的稀釋度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小時，洗刷。
3. 加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中參與臨時制作的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。
4. 停止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中參與2M硫酸0.05ml。
5. 效果判定：可于白色布景上，直接用肉眼查詢效果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+"、“-"號表示。也可測OD值：人胚腎細胞類檢測儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。人胚腎細胞類用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg／ml，每孔加0.1ml，4℃過液。次日洗刷3次。
6. 加一定稀釋的待檢樣品（不知道抗體）0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時,洗刷。（一同做空白、陰性及陽性孔對照）
7. 于反應(yīng)孔中，參與新鮮稀釋的酶標第二抗體（抗抗體）0.1ml，37℃孵育30-60分鐘，洗刷,zui后一遍用DDW洗刷。
8. 于各反應(yīng)孔中參與人胚腎細胞臨時制作的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘
9. 于各反應(yīng)孔中參與2M硫酸0.05ml
特丁隆 標準品 ：34014-18-1 250mg
四氯硝基苯 標準品 ：117-18-0 250mg
氟苯脲 標準品 ：83121-18-0 250mg
七氟菊酯 標準品 ：79538-32-2 100mg
雙硫磷 標準品 ：3383-96-8 250mg
得殺草 標準品 ：149979-41-9 100mg
特草定 標準品 ：5902-51-2 250mg
特丁磷 標準品 ：13071-79-9 100mg
特丁凈 標準品 ：886-50-0 250mg
