Quick Cell TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒（紅色）
產(chǎn)品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 | 保存 | 價格（元） |
Quick Cell TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒（紅色） | A5470L2680 | 50 T | -20℃避光 | 4248 |
產(chǎn)品描述
DNA斷裂是晚期細胞凋亡的一個特征。DNA在細胞凋亡過程中被激活的內(nèi)源性核酸內(nèi)切酶切割成大小不同的片段，并同時產(chǎn)生與切口相同數(shù)目的3'-OH末端，末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶(Terminal deoxynucleotidyl Transferase TdT)能識別并把脫氧核糖核苷酸連接到切口的3'-OH。TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick End Labeling)是一種通過預先標記脫氧核糖核苷酸（dUTP），間接標記DNA切口3'-OH，進而通過觀察熒光反映細胞凋亡情況的檢測方法。
李記生物研發(fā)的主要在兩個方面做了改進：1）在Alexa Fluor的基礎(chǔ)上改進了染料，使熒光更為穩(wěn)定；2）本試劑盒采用不含甲胂酸鈉(sodium cacodylate)的專有緩沖液，確保檢測結(jié)果真實反應(yīng)細胞凋亡情況。幾乎所有的TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒都包含甲胂酸鈉(sodium cacodylate)，這種化合物對細胞有高度毒性，這種高毒性可誘導細胞凋亡，促進DNA降解產(chǎn)生DNA單鏈或雙鏈片段，使細胞凋亡的檢測結(jié)果失真。提供了反應(yīng)所需的全部組份，可用于多功能酶標儀、熒光顯微鏡或流式細胞儀檢測，可用TRITC通道或設(shè)置Ex /Em = 550nm/590-650 nm檢測信號。
試劑盒組成
組份 | 數(shù)量 |
組份A: 100 X Tunel Red | 25 μL |
組份B: 反應(yīng)緩沖液 | 5 mL |
組份C: 1000 X Hoechst | 50 μL |
運輸與保存方法
冰袋運輸。-20℃避光保存，保質(zhì)期12個月。
使用方法（以96孔板為例）
1. 準備
a. 培養(yǎng)細胞到合適密度。貼壁細胞*密度30000-50000 細胞/孔（96孔板）,懸浮細胞*密度1-2 x 106 細胞/mL。陰性和陽性對照的細胞同時培養(yǎng)或調(diào)整到相同 密度，陽性對照根據(jù)需要確定是否設(shè)置。
b. 準備試劑：4%甲醛細胞固定液；細胞通透液（0.2% Triton X-100 in PBS選做）；DNA酶 I反應(yīng)液（選做）
2. 固定細胞增加通透性
a. 去除培養(yǎng)液，每孔添加100 μL 的4%甲醛固定液，在室溫條件下孵育20-30分鐘，去除固定液。
b.根據(jù)需要選做：添加100μL/孔的細胞通透試劑（0.2% Triton X-100 in PBS. 需自備），在室溫孵育10分鐘。
c. 用PBS緩沖液沖洗細胞2-3次
d. 若設(shè)置陽性對照，可在TUNEL反應(yīng)前，在陽性對照樣品中加入DNA酶 I，室溫孵育30分鐘后，與樣品一同進行TUNEL反應(yīng)。
3. TUNEL反應(yīng)
a. 按下表準備反應(yīng)混合液（多樣品檢測可參考表中數(shù)據(jù)放大，不同細胞系可摸索建立*反應(yīng)體系。）
反應(yīng)組份 | 每孔用量 |
組份A: 100 X Tunel Red | 0.5 μL |
組份B: 反應(yīng)緩沖液 | 50 μL |
總體積 | 50.5 μL |
b. 每孔加入50 μL上一步配好的反應(yīng)混合液，37℃孵育60分鐘。
c. 去除反應(yīng)混合液，每孔用200 μL的PBS緩沖液沖洗細胞3-5次。
4. 觀察熒光信號，可以用熒光顯微鏡、流式細胞儀、熒光酶標儀在Ex /Em = 550nm/590-650 nm條件下觀測。
5. (選做)用1 X Hoechst(組份C, Ex/Em=350/460nm)染色做成像分析。
