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常見的色譜法有哪些?分別有哪些特點?

閱讀:1273發(fā)布時間:2022-3-24

常見的色譜法有哪些?分別有哪些特點?基于分子分離的不同需求,色譜已經(jīng)發(fā)展了多年。今天,在世界各地的實驗室中,幾種色譜正被用于不同的目的。

紙色譜——浸泡在液體中的紙用作固定相,而液體溶劑用作流動相。紙張干燥后,分離的成分會在紙上顯示為斑點。


液相色譜——該技術(shù)使用二氧化硅和氧化鋁作為固定相,有機溶劑作為流動相。


薄層色譜法——在這里,塑料或玻璃片上涂有一薄層吸附劑,如氧化鋁(Al2O3)或二氧化硅(SiO2)。組分根據(jù)其對吸附劑的親和力進行分離,并在色譜分離后在紙上顯示為單個斑點。


柱色譜——柱色譜類似于薄層色譜,使用相同的固定相和流動相。不同之處在于,兩個相都包含在一個垂直的玻璃柱中,分離過程非常耗時。


氣相色譜——在氣相色譜中,惰性氣體(氦氣、氮氣、氬氣)用作流動相,通常由硅聚合物組成的固體或液體作為固定相。樣品混合物被引入襯有固定相的柱中,并被選擇性吸附。當(dāng)分離的分子離開色譜柱時,使用檢測器進行識別。


高效液相色譜——高效液相色譜是柱色譜的高級形式。在高效液相色譜中,樣品混合物被引入流動相(通常是溶劑),然后在高壓下將其泵入緊密填充的分析柱中,以快速分離樣品分子。這種分離依賴于分子對流動相和包裹柱(固定相)的顆粒的親和力。也叫高壓液相色譜。親和色譜–該方法用于根據(jù)不同同源成分(如酶和底物、抗原和抗體或受體和配體)之間的特定親和力分離生化混合物。


離子交換色譜——這是根據(jù)離子和極性分子對離子交換劑的親和力來分離離子和極性分子。它有助于蛋白質(zhì)、氨基酸和核苷酸等帶電分子的分離。這里,流動相通常是導(dǎo)電溶液(由鹽濃度決定)。樣品分子對帶相反電荷的固體支持物的吸附由特定的離子性質(zhì)驅(qū)動,例如分子上電荷的數(shù)量和位置。


分離包括不同的條件,如離子強度和酸堿度,以便溶質(zhì)分子按其結(jié)合強度的順序從柱中釋放出來,弱結(jié)合的物質(zhì)首先被洗脫。



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