小鼠促甲狀腺激素(TSH)酶聯(lián)免疫試劑盒【工作原理】
促甲狀腺激素(thyrotropin,thyroid stimulating hormone,TSH)是腺垂體分泌的促進(jìn)甲狀腺的生長和機(jī)能的激素。TSH為一種糖蛋白,含211個氨基酸,糖類約占整個分子的15%。整個分子由兩條肽鏈——α鏈和β鏈組成。TSH全面促進(jìn)甲狀腺的機(jī)能,稍早出現(xiàn)的是促進(jìn)甲狀腺激素的釋放,稍晚出的為促進(jìn)T4、T3的合成,包括加強(qiáng)碘泵活性,增強(qiáng)過氧化物酶活性,促進(jìn)甲狀腺球蛋白合成及*碘化等各個環(huán)節(jié)。所提供的ELISA Kit是典型的夾心法酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒(ELISA)。預(yù)先包被的抗體為多克隆抗體。檢測相抗體也為多克隆抗體,經(jīng)*(biotin)標(biāo)記。樣品和*標(biāo)記抗體先后加入酶標(biāo)板孔反應(yīng)后,PBS或TBS洗滌。隨后加入過氧化物酶標(biāo)記的親和素反應(yīng);經(jīng)過PBS或TBS的*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的待測因子呈正相關(guān)。
小鼠促甲狀腺激素(TSH)酶聯(lián)免疫試劑盒【注意事項】
1. 從-20℃取出的試劑盒,在4℃解凍過夜。盒內(nèi)每一瓶解凍的溶液在開啟瓶蓋之前都要輕輕搖勻,避免解凍時出現(xiàn)的分層,否則會出現(xiàn)濃度不均一的現(xiàn)象。
2. 開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。
3. 配制各種試劑時,切記混勻!
4. 用戶在初次使用試劑盒時,應(yīng)將各種試劑管離心數(shù)分鐘,以便試劑集中到管底。
5. 建議所有小鼠TSH標(biāo)準(zhǔn)品、樣本都做雙份檢測。
6. 要嚴(yán)格避免操作過程中酶標(biāo)板干燥。干燥會使酶標(biāo)板上生物成份迅速失活!
7. 為免交叉污染,要避免重復(fù)使用手中的吸頭和試管。
【洗板方法】
手工洗板方法:吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,酶標(biāo)板朝下用力拍幾次;將*的PBS或TBS洗滌緩沖液至少0.35ml注入孔內(nèi),浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要,重復(fù)此過程數(shù)次。
自動洗板:如果有自動洗板機(jī),應(yīng)在熟練使用后再用到正式實驗過程中。
【樣品的準(zhǔn)備和保存】
樣品如果不立即分析,應(yīng)分裝后冷凍保存,且避免反復(fù)凍融。
血清——用干凈試管收集血液,室溫凝固2小時或4℃過夜,離心1000×g 10分鐘,收集血清。立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。
細(xì)胞培養(yǎng)、組織勻漿、體液——離心去除沉淀,立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。