免疫組化檢測試劑盒實驗中為了確定信號和zui低背景應(yīng)將捕獲抗體和檢測抗體在預(yù)實驗中進行彼此相抗的滴定。同時，應(yīng)包括在適當(dāng)范圍內(nèi)的標準品的系列稀釋。按試劑說明書常規(guī)提供的范圍進行操作。
    標準品的配制：對于每種細胞因子應(yīng)仔細閱讀說明書，注意每批的細節(jié)。在使用細胞因子前，瞬時離心試劑瓶，盡可能多地收回其中的細胞因子。根據(jù)每批說明書中的細節(jié)，將凍干的細胞因子復(fù)溶。
    一般待測抗原標準曲線的線性范圍的可通過將標準品做8次2倍系列稀釋從2000pg/ml 到15pg/ml。可利用標準的ELISA操作流程、放大試劑盒、第三類試劑、或改變酶底物系統(tǒng)可在一定范圍內(nèi)提高靈敏度。為了優(yōu)化靈敏度，建議放置一個晚上孵育標準品和標本。若使用過氧化物酶作為顯色系統(tǒng)，應(yīng)嚴禁在洗液和稀釋液中加疊氮鈉，疊氮鈉可抑制過氧化物酶的活性。當(dāng)測定混合液體中的抗原時，如血清，建議在標本稀釋液中加不相干的Ig。
1. 仔細閱讀說明書；
2. 確定試劑盒在有效期內(nèi)；
3. 按說明書確定所有試劑齊全（數(shù)量、體積）；
4. 標本制備要規(guī)范，每份標本體積要按2-3個復(fù)孔以上的量制備（貯存），盡量分裝做備份；
5. 注意低溫保存；
6. 準備好所有實驗額外所需物品；
7. 根據(jù)檢測標本數(shù)量確定所需試劑的量；
8. 按說明書將所用試劑平衡至室溫，配制所需試劑。
    在一般的概念里，免疫組化檢測試劑盒技術(shù)的可操作性強，不需復(fù)雜設(shè)備，甚至*手工加樣、洗板和肉眼判讀結(jié)果，便可完成該技術(shù)的操作。隨著人們對質(zhì)量控制意識的加強，盡可能做到zui低限度的減少系統(tǒng)誤差，以及減少勞動強度等觀念的不斷改進，解決ELISA技術(shù)中加樣、溫育、洗板及判讀結(jié)果過程的系統(tǒng)誤差問題及率運作問題導(dǎo)致了自動化概念的形成。ELISA技術(shù)的加樣、溫育、洗板及判讀結(jié)果過程的科學(xué)地、有機地、系統(tǒng)地結(jié)合，盡可能地減少各環(huán)節(jié)的人為因素的影響，便成為自動化ELISA技術(shù)的理論基礎(chǔ)。
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免疫組化檢測試劑盒