江蘇省尖底錐形過濾器
應(yīng)當(dāng)注意，受到上述法規(guī)約束的過濾器既包括除菌過濾器、微生物污染水平控制過濾器，也同樣包括用于各種制藥生產(chǎn)工藝中去除顆粒污染物、符合上述法規(guī)要求與藥品直接接觸的過濾器。
　　對于直接與藥品接觸的相關(guān)法規(guī)要求，通常過濾器的生產(chǎn)者和使用者，均需要完成以下各種檢測和驗證研究：
　　過濾器與工藝流體的交互反應(yīng)
　　因除菌過濾往往是藥品生產(chǎn)的Z終工序之一。應(yīng)評估過濾器對Z終產(chǎn)品的

詳細(xì)介紹

江蘇省尖底錐形過濾器

除菌過濾的目的是從原料藥液里通過過濾去除細(xì)菌。如果產(chǎn)品無法進(jìn)行zui終滅菌，需要采用0.22mm（更小或相同過濾效力）的除菌過濾器進(jìn)行除菌過濾。新版GMP附錄1“第十三章，非zui終滅菌產(chǎn)品的過濾”第九十一條規(guī)定，與其他滅菌方法相比，除菌過濾的風(fēng)險zui大，因此，宜安裝第二只已滅菌的除菌過濾器再過濾一次藥液。圖一為除菌過濾工藝的工藝流程示意圖，澄清過濾一般采用深層濾芯，去除料液中的不純物質(zhì)，降低料液濁度和生物負(fù)荷度。無菌過濾點采用預(yù)過濾與除菌過濾組合的方式確保除菌效率和濾芯過濾性能的穩(wěn)定性。法規(guī)要求的*個要點是在采用除菌過濾方法時，首先確認(rèn)采用的過濾器為“除菌級”，達(dá)到此要求后，除菌過濾法中的其它無菌保障措施才有意義。定義過濾器是否為除菌級，需要依靠過濾器的微生物截留能力，并完成相關(guān)的標(biāo)準(zhǔn)方法驗證和工藝驗證。目前業(yè)界缺乏統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)來衡量孔徑，孔徑的標(biāo)準(zhǔn)對預(yù)測微生物截留和比較不同生產(chǎn)商生產(chǎn)的過濾器沒有實際的意義，因而，需要用微生物截留能力來定義除菌級過濾器（2010版-無菌制劑GMP實施指南）。以此可以看出細(xì)菌截留試驗對于除菌濾芯驗證的重要性。
細(xì)菌截留實驗準(zhǔn)備
新版GMP實施指南中提到除菌級過濾器驗證的兩個主要因素：一是濾膜的級別，要求可適用的標(biāo)準(zhǔn)化試驗或類似的方法以細(xì)菌挑戰(zhàn)的方式進(jìn)行；二是工藝驗證，由過濾器的使用者或指派的實驗設(shè)施（例如，過濾器的生產(chǎn)者或協(xié)議實驗室），使用有代表性的微生物進(jìn)行挑戰(zhàn)，證明過濾器在生產(chǎn)條件下，可以*去除每個產(chǎn)品或產(chǎn)品家族中的微生物。應(yīng)建立針對每個產(chǎn)品組的科學(xué)解釋并可能需要在實施驗證前經(jīng)合適的監(jiān)管機(jī)構(gòu)審查。細(xì)菌截留實驗就可以*驗證過濾濾芯的細(xì)菌截留性能，也可以充分反映整個工藝環(huán)節(jié)對濾芯過濾性能的影響。因此，在截留試驗前必須做好如下準(zhǔn)備：
過濾工藝評估：通過驗證服務(wù)調(diào)查問卷，客戶溝通甚至現(xiàn)場拜訪，需要*了解客戶工藝流程，包括溶劑性質(zhì)（例如水基的、酸、堿、有機(jī)的）、過濾時間、工藝壓差、工藝流速、工藝溫度和過濾器設(shè)計規(guī)范，實驗室根據(jù)具體的情況，再結(jié)合過濾器本身的一些特性，模擬縮小化的工藝流程，這些流程需要與實際工藝流程相符或者更為惡劣，確保細(xì)菌截留實驗*按照或者更高于實際工藝制定。
細(xì)菌培養(yǎng)和篩選：細(xì)菌截留試驗采用缺陷假單胞菌（Brevundimonasdiminuta,ATCC19146），要求通過光學(xué)顯微鏡或者掃描電鏡觀察，直徑為0.3-0.4微米,長度為0.6-1.0微米，且呈單分散狀態(tài)，這些重要特性需每次進(jìn)行觀察和篩選，以免對截留試驗造成影響。

江蘇省尖底錐形過濾器

根據(jù)ASTM838-83對除菌級濾芯的定義，用107CFU/cm2的缺陷性假單胞菌（ATCC19146）進(jìn)行試驗，下游濾出液無菌。細(xì)菌挑戰(zhàn)試驗研究的目的就是通過實驗獲得文件證據(jù)，證明在模擬工藝條件下，過濾過程可以持續(xù)去除懸浮于產(chǎn)品或替代流體中的高水平的標(biāo)準(zhǔn)細(xì)菌或相關(guān)微生物污染分離物。
細(xì)菌截留試驗進(jìn)行前，需要*行細(xì)菌存活性試驗，來了解客戶產(chǎn)品在模擬的工藝條件下對截留菌生長的影響，試想如果客戶產(chǎn)品在模擬工藝條件下，會對截留菌生長造成影響，甚至無法存活，那分析濾膜未發(fā)現(xiàn)截留菌，是產(chǎn)品對截留菌的影響造成還是測試濾膜過濾的緣故都無從而知，因此細(xì)菌存活性試驗是截留試驗的預(yù)實驗，可以為截留試驗提供重要的理論依據(jù)，以此來確定截留試驗的過程，是采用單步還是多步進(jìn)行試驗。
細(xì)菌截留試驗測試過程中使用如圖4所示裝置，一共包括CTL1-4四套截留裝置，CTL1-3即為所要驗證濾芯的三個重復(fù)，CTL-4為整個實驗的對照組，其中TF1，2，3分別為不同批號的測試濾膜，為過濾精度為0.22微米或者0.2微米的除菌濾膜，且每個TF上下游都加裝壓力表，用于監(jiān)控整個實驗過程中，測試濾膜兩端的壓力，TF4為對照，為過濾精度為0.45微米的濾膜，AF-1，2，3，4均為分析濾膜。實驗過程中將產(chǎn)品或者替代液配置成一定濃度的挑戰(zhàn)液，一般要求不低于107CFU/cm2，按照模擬的縮小化工藝條件，采用蠕動泵將其按照一定的速度通過測試和分析濾膜，在試驗過程中，需要在不同時間點，對壓力，流速，溫度等關(guān)鍵參數(shù)進(jìn)行監(jiān)控并記錄，且在細(xì)菌截留試驗開始前和結(jié)束后，對微生物進(jìn)行平板菌落計數(shù)確定挑戰(zhàn)菌的濃度。
當(dāng)截留試驗結(jié)束后，需要將分析濾膜放于平板上培養(yǎng)，如果上游的測試濾膜為除菌濾膜，即圖中的TF1，2，3，則下游即分析濾膜上不會發(fā)現(xiàn)截留菌生長，如果上游的測試濾膜為非除菌濾膜即TF-4，則下游即分析濾膜上會發(fā)現(xiàn)挑戰(zhàn)菌生長。根據(jù)分析濾膜上是否有挑戰(zhàn)菌生長進(jìn)行判斷，對于對照CTL-4，因0.45微米濾膜對于挑戰(zhàn)菌濃度在104～106CFU/cm2時，無法達(dá)到除菌過濾的效果，所以對照組下游的分析濾膜，即AF-4必定會有挑戰(zhàn)菌的生長，這樣一則可以對挑戰(zhàn)菌進(jìn)行鑒定，鑒定該挑戰(zhàn)菌的純度及形態(tài)特征，二則可以判斷挑戰(zhàn)液的濃度是否已經(jīng)達(dá)到預(yù)期的濃度。
實驗結(jié)果與分析
細(xì)菌截留實驗結(jié)果包括細(xì)菌截留前后膜片完整性測試值，陰性對照結(jié)果，產(chǎn)品循環(huán)工藝參數(shù)和分析膜片結(jié)果四個部分。如表1記錄了實驗?zāi)て暾詼y試結(jié)果，從中可以對截留試驗前和后，濾膜的完整性數(shù)據(jù)進(jìn)行評估，是否符合濾芯廠家對于該類濾芯的完整性要求。
表2陰性對照結(jié)果，需要確認(rèn)在未接種截留菌前整個截留裝置是否保持無菌。表三為分析濾膜結(jié)果，也是決定細(xì)菌截留試驗成敗的關(guān)鍵指標(biāo)，分為兩部分，*部分為截留菌的濃度，需按要求菌不低于107CFU/cm2，可以分析達(dá)到了ASTM-838對除菌級濾芯截留濃度的要求，另外一部分為分析濾膜的結(jié)果，對于TCL-1，2，3裝置中AF均未發(fā)現(xiàn)截留菌，說明TF可以恒定高效的去除挑戰(zhàn)液中的截留菌，對于對照組的TCL-4下游的AF4，則發(fā)現(xiàn)有截留菌生長，可以利用特定的鑒定試劑盒，對結(jié)果進(jìn)行鑒定，確認(rèn)下游所發(fā)現(xiàn)的細(xì)菌有且僅為我們的標(biāo)準(zhǔn)截留菌。

當(dāng)陽性對照組平均含菌量在 5×`10^4` CFU/100 ML～5×`10^5` CFU/100 ML。陰性對照組均無菌生長時。在3次試驗所有流量段水樣中大腸桿菌下降至 0/100 ML 時，可判為實驗室試驗中飲水消毒效果合格。若陽性對照組和陰性對照組含菌量未達(dá)上述要求,應(yīng)尋找原因,糾正后重做試驗。
關(guān)于消毒技術(shù)規(guī)范?生活飲用水消毒效果鑒定中飲水過濾器除菌試驗：
1）試驗分組
①試驗組。申請消毒產(chǎn)品衛(wèi)生許可證時，按使用說明書規(guī)定的zui大流量,測定其對大腸桿菌的除菌效果。
②陽性對照組,以未經(jīng)消毒的試驗菌污染水樣進(jìn)行活菌培養(yǎng)計數(shù);
③陰性對照組,以試驗所用同批次未經(jīng)使用的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng),觀察有無細(xì)菌生長。
2）操作程序
①配制試驗菌污染水樣。
②取 2 份試驗菌污染水樣,進(jìn)行大腸桿菌活菌計數(shù)(陽性對照組)。
③按過濾器產(chǎn)品規(guī)定的zui大流量,將試驗菌污染水樣分段通過飲水過濾除菌裝置。按規(guī)定過濾的水量,用無菌三角瓶分段采集:初始、1/4、2/4、3/4、4/4 等各段流出的水樣(不需加中和劑)。
④對過濾后各段水樣,分別取 100ML、10ML、1ML各 2 份,進(jìn)行大腸桿菌活菌培養(yǎng)計數(shù)。
⑤將未接種大腸桿菌的試驗用同批培養(yǎng)基平板 2 個,置培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(陰性對照組)。
⑥試驗重復(fù) 3 次。