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細胞培養(yǎng)常見問題和解決方法
2019-4-25 閱讀(1011)
細胞培養(yǎng)技術是指在動植物體外生長,并不再形成組織。培養(yǎng)物一般為細胞群,也可以是單個細胞,近年來,其已經(jīng)成為很多生物制品的主要材料,并廣泛應用于醫(yī)學病理研究,本文針對細胞培養(yǎng)存在的一些常見問題進行分析研究并提出相應防控措施,現(xiàn)總結(jié)如下：
問題1：培養(yǎng)液pH值變化太快
可能原因：
(1)CO2張力不對
(2)培養(yǎng)瓶蓋擰得太緊
(3)NaHCO3緩沖系統(tǒng)緩沖力不足
(4)培養(yǎng)液中鹽濃度不正確
(5)細菌、酵母或真菌污染
建議解決方法：
(1)按培養(yǎng)液中NaHCO3濃度增加或減少培養(yǎng)箱內(nèi)CO2濃度，2.0g/L到3.7g/L濃度NaHCO3對應CO2濃度為5%到10%。
(2)松開瓶蓋1/4圈。
(3)改用不依賴CO2培養(yǎng)液。加HEPES緩沖液至10到25mM終濃度。
(4)在CO2培養(yǎng)環(huán)境中改用基于Earle′s鹽配制的培養(yǎng)液，在大氣培養(yǎng)環(huán)境中培養(yǎng)改用Hanks鹽配制的培養(yǎng)液。
(5)丟棄培養(yǎng)物，或用抗生素除菌。
問題2：培養(yǎng)液出現(xiàn)沉淀，但pH值不變
可能原因：
(1)洗滌劑清洗后殘留有磷酸鹽，將培養(yǎng)基成分沉淀下來
(2)冰凍保存培養(yǎng)液
建議解決方法：
(1)用去離子水反復沖洗玻璃器皿，然后滅菌。
(2)將培養(yǎng)液加熱到37℃，搖動使其溶解如沉淀仍然存在，丟棄培養(yǎng)液。
問題3：培養(yǎng)液出現(xiàn)沉淀，同時pH發(fā)生變化
可能原因：
細菌或真菌污染
建議解決方法：
丟棄培養(yǎng)物，或用抗生素除菌。
