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江蘇菲亞生物科技有限公司
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簡易且能避免污染的細(xì)胞培養(yǎng)方法
2018-9-10 閱讀(894)
具體配液方法：
步，配制1L培養(yǎng)液。培養(yǎng)基中含有酚紅指示劑，偏堿時液體為深紅或紫色，偏酸時則呈黃色。取配1L培養(yǎng)液的粉劑培養(yǎng)基，加入750ml三蒸水或去離子水，搖勻(一般培養(yǎng)液呈橘紅色)；再加入碳酸氫鈉1～1．1g，至*溶解(呈深紅色)；后再加三蒸水或去離子水至1L止。
第二步，插吸管于配好的培養(yǎng)液內(nèi)，通入二氧化碳?xì)怏w。隨著二氧化碳?xì)獾娜谌?，液體逐漸變成黃色。用一次性0．22 m孔徑的濾膜于正壓情況下將該液體過濾除菌。在此過程中，由于部分二氧化碳?xì)怏w溢出，液體漸成橘黃色。此時迅速將其分裝到4個250ml的瓶內(nèi)，一定塞嚴(yán)或擰緊瓶。在無菌情況下取樣本數(shù)毫升，37。c無菌培養(yǎng)72h，確定該批培養(yǎng)液無污染后方可使用。常使用的培養(yǎng)液存放于4℃冰箱內(nèi)，其它暫時不用的可放入一20。c冰箱內(nèi)保存。
第三步，根據(jù)不同細(xì)胞系的需求添加不同量血清和抗生素。將配好的培養(yǎng)液吸入小培養(yǎng)瓶內(nèi)，再將適量細(xì)胞吸入，塞嚴(yán)或擰緊瓶蓋，置37。c普通隔水式恒溫箱內(nèi)即可。操作過程中因有少量二氧化碳?xì)怏w溢出，液體呈橘紅色，酸堿度(pH) 約為7．0～7．2。如果細(xì)胞較少或者生長較慢。液體的pH值似宜偏酸些為好。
