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江蘇菲亞生物科技有限公司
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適合ELISA試劑盒檢測(cè)樣本的方法
2017-8-21 閱讀(831)
血清是zui常用的ELISA試劑盒標(biāo)本之一，ELISA檢測(cè)中血漿一般可視為與血清同等的標(biāo)本，標(biāo)本中干擾性物質(zhì)是引起檢測(cè)后結(jié)果偏高或偏低的主要原因，干擾性物質(zhì)分為內(nèi)源性物質(zhì)和外源性物質(zhì)兩大類；由于各種人為原因引起的標(biāo)本溶血，均可因紅細(xì)胞破壞溶解時(shí)釋放出大量具有過(guò)氧化物酶活性的血紅蛋白，在以辣根過(guò)氧化物酶為標(biāo)記的 ELISA測(cè)定中，會(huì)導(dǎo)致非特異性顯色，干擾測(cè)定結(jié)果。
標(biāo)本受細(xì)菌污染 ：因菌體中可能含有內(nèi)源性辣根過(guò)氧化物酶，因此，被細(xì)菌污染的標(biāo)本同溶血標(biāo)本一樣，亦可產(chǎn)生非特異性顯色而干擾測(cè)定結(jié)果。
標(biāo)本保存不當(dāng) ：在冰箱中保存過(guò)久的標(biāo)本，血清中IgG可聚合成多聚體、AFP可形成二聚體，在間接法ELISA測(cè)定中會(huì)導(dǎo)致本底過(guò)深、甚至造成檢測(cè)OD值偏高；
標(biāo)本凝集不全：在ELISA檢測(cè)中影響血清血漿樣本的因素很多，ELISA試劑盒在考慮試劑因素和操作因素之外，也應(yīng)從標(biāo)本因素方面進(jìn)行分析。
常見的干擾物質(zhì)有：類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、嗜異性抗體、嗜靶抗原自身抗體、醫(yī)源性誘導(dǎo)的抗鼠Ig (s)抗體、交叉反應(yīng)物質(zhì)和其它物質(zhì)等。
類風(fēng)濕因子 ：血清中IgM、IgG型類風(fēng)濕因子（RF）在ELISA檢測(cè)中，可與ELISA系統(tǒng)中的捕獲抗體及酶標(biāo)記二抗的FC段直接結(jié)合，從而導(dǎo)致檢測(cè)OD值偏高。
補(bǔ)體 ： ELISA系統(tǒng)中固相一抗和標(biāo)記二抗過(guò)程中，抗體分子發(fā)生變構(gòu)，其FC段的補(bǔ)體C1q分子結(jié)合位點(diǎn)被暴露出來(lái)，使C1q 可以將二者連接起來(lái)，從而造成檢測(cè)OD值偏高。
嗜異性抗體；人類血清中含有能與嚙齒類動(dòng)物（如鼠等）Ig (s) 結(jié)合的天然嗜異性抗體，可將ELISA系統(tǒng)中一抗和二抗連接起來(lái)，也能造成檢測(cè)OD值偏高。
此外血清中嗜靶抗原自身抗體、醫(yī)源性誘導(dǎo)的抗鼠Ig (s)抗體、交叉反應(yīng)物質(zhì)及血清中脂質(zhì)過(guò)高、ELISA試劑盒膽紅素、血紅蛋白及血液粘度過(guò)大等，均對(duì)ELISA測(cè)定結(jié)果有干擾作用。
