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如何避免ELISA實(shí)驗(yàn)的的過失
2017-8-7 閱讀(916)
Elisa實(shí)驗(yàn)是一種敏感性高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)診斷方法。由于其試劑穩(wěn)定、易保存，操作簡便，結(jié)果判斷較客觀等因素，已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)檢驗(yàn)的各領(lǐng)域中。依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并*洗滌。實(shí)驗(yàn)的過程中不可避免會造成過失，直接影響實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，那怎樣避免ELISA實(shí)驗(yàn)過程中的過失呢？讓我們一起關(guān)注以下內(nèi)容
*：檢驗(yàn)技師應(yīng)具備從事實(shí)驗(yàn)室操作的基本素質(zhì)和實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)。能熟練操作實(shí)驗(yàn)儀器、器械，具有一定總結(jié)和分析問題的能力，對實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的意外情況能及時妥善解決。
第二：操作前仔細(xì)閱讀說明書，嚴(yán)格按照說明書要求進(jìn)行規(guī)范化操作。不同批號的試劑不可混用。值得改進(jìn)的地方，反復(fù)試驗(yàn)確定成立后才能改進(jìn)，比如洗板次數(shù)的掌握等。
第三：評估試劑的實(shí)用性，試劑的穩(wěn)定與否，對準(zhǔn)確率的高低到頭重要。在試劑啟用前，應(yīng)進(jìn)行陰、陽對照及樣品反復(fù)比照試驗(yàn)，判定試劑符合要求后方可使用。
第四：加樣要準(zhǔn)確、快速。加樣不準(zhǔn)確，酶生成物的量不能確定，直接影響顯色結(jié)果。另外，顯色的深淺及A值的測定與加入顯色劑和終止液的量有關(guān)，所以加樣應(yīng)慎重。要求在一定時間內(nèi)加樣完畢的實(shí)驗(yàn)，如果加樣遲緩，便出現(xiàn)誤差，而且試劑長時間暴露在外，尤其室溫過高時，保存期會縮短甚至失效。
第五：使用校對過的微量移液器，排除自然誤差。移液器準(zhǔn)確與否對定量檢測尤為重要
第六：嚴(yán)格掌握顯色時間，顯色時間過短，加入終止液反應(yīng)終止后，底物結(jié)合物的量過少，易出現(xiàn)假陰性。超過顯色要求時間后顯色，應(yīng)判為假陽性，這可能與試劑本身有關(guān)。加顯色劑后立即顯色，不可報陽性，這可能是本底顯色的結(jié)果。
第七：洗滌*，洗板不*，酶結(jié)合物本底顯色會呈現(xiàn)假陽性。另外，洗滌液要新鮮，現(xiàn)用現(xiàn)配，陳舊的洗滌液會出現(xiàn)本底增高現(xiàn)象，也可能出現(xiàn)假陽性。
第八：嚴(yán)控反應(yīng)時間，反應(yīng)時間過長，酶失活；反應(yīng)時間過短，酶結(jié)合物不能與血清中的微生物抗原抗體充分結(jié)合，生成物結(jié)構(gòu)松散不牢固，容易洗掉，都可能造成假陰性。
