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江蘇菲亞生物科技有限公司
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微藻基因組提取的方法概述
2017-3-9 閱讀(976)
微藻基因組提取的方法主要有以下幾種：
1、采用CTAB法
2、收集藻體
3、液氮研磨
4、加入CTAB提取液
5、苯酚抽提、乙醇沉淀
6、洗滌
一般來(lái)說(shuō)，液氮研磨是的方法。原因如下：
1、液氮冷凍使得藻體變脆，易于破碎。
2、液氮研磨的力度，一般不會(huì)對(duì)基因組DNA造成機(jī)械損傷。
3、在低溫下，各種酶包括核酸酶的活性較低，可以zui大程度防止核酸的降解，這點(diǎn)在制備RNA的時(shí)候，尤為重要。所以，在制備微藻基因組時(shí)，應(yīng)該盡量用液氮研磨。
當(dāng)然，用液氮往往比較麻煩；并且有潛在的危險(xiǎn)，所以在某些情況下，也可以用一些替代性的方法，主要分為三類：
*類、常溫研磨。即用玻璃勻漿器或者組織勻漿機(jī)來(lái)破碎細(xì)胞，但需要做一些與實(shí)驗(yàn)來(lái)確定研磨的時(shí)間/力度。
第二類、酶解。即用針對(duì)于研究對(duì)象細(xì)胞壁成分的酶，來(lái)酶解細(xì)胞壁，進(jìn)而達(dá)到破碎細(xì)胞的目的。常用的酶有果膠酶、纖維素酶、半纖維素酶、溶菌酶、海螺酶、蝸牛酶以及DRISELASW 崩潰酶，同樣需要做預(yù)試驗(yàn)確定酶的種類和用量，以及酶解時(shí)間。
第三類、使用強(qiáng)的裂解液。例如異硫氰酸胍等，經(jīng)過(guò)長(zhǎng)時(shí)間浸泡，可以“溶解”藻細(xì)胞。
