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技術(shù)文章

安捷倫液相色譜儀HPLC的日常維護及保養(yǎng)及使用方法

閱讀:8          發(fā)布時間:2025-1-14
安捷倫液相色譜儀HPLC的日常維護及保養(yǎng)  1、手動進樣器:  平時應(yīng)該注意使用二次蒸餾水和甲醇在裝載狀態(tài)及進樣分析狀態(tài)清洗;如果出現(xiàn)漏液現(xiàn)象,原因極可能為轉(zhuǎn)子密封墊磨損或污染,一般要申請維修或更換配件。  2、排液閥:  此處不能密封或漏液時一般是其中的墊片污染或磨損,可卸下后取出其墊片用異丙醇超聲波清洗或更換墊圈?! ?、單向閥:  如遇到泵壓不穩(wěn)或流動相不能抽取,則可能是單向閥出現(xiàn)問題,卸下用異丙醇超聲波清洗,清洗時須按其安裝的方向放置在小燒杯中,切記不可與安裝方向倒置超洗!  4、工作站:  出現(xiàn)死機可重起計算機;不正常運行時,首先可更換電腦測試其硬件故障;或在本機上重新插拔接口、重新安裝軟件?! ?、過濾器:安捷倫液相色譜儀  當色譜峰出現(xiàn)異常情況時,有可能是此部件被污染, 拆下用異丙醇超洗或更換過濾墊片。  6、吸濾頭:  特殊情況下可拆下濾頭抽取以判斷其中是否堵塞;亦可用注射器吸取流動相通過吸濾頭打出以判斷其是否堵塞。若有堵塞情況可用異丙醇超聲波清洗;清洗不成功則需要更換?! ?、流動相的抽作要求:  液相級色譜醇,二次蒸餾水,緩沖鹽一定要過濾;  流動相脫氣至關(guān)重要(可采用抽濾,超聲波脫氣等方法)  8、流通池:  在色譜峰不正常時會可能是此部件補污染??刹鹦逗笕〕銎渲械膲|片用異丙醇超洗(可根據(jù)說明書進行操作或申請維修)?! ?、泵頭:  泵頭漏液或出現(xiàn)其它故障一般要申請維修(如漏液,或更換柱塞桿及其密封墊等)  泵壓不穩(wěn):  1、泵頭有氣泡——流動相脫氣/大流量沖洗泵/用注射器抽取流動動相  2、單向閥故障——清洗  若上述操作仍不能解決,可用異丙醇沖洗流動(無色譜柱沖洗,由手動進樣器直接進檢測器),流量為3-4ml/min,沖洗50分鐘左右,然后重新安裝色譜柱,更換流動相平衡,如此再不能解決泵壓波動故障,可申請更換配件。  10.漏液處理:  C18柱不能進蛋白樣品、血樣,生物樣品?! ∫⒁庵拥腜H值范圍,不得注射強酸強堿的樣品,特別是堿性樣品?! ¢L時間不用儀器,應(yīng)該將柱子取上用堵頭封好保存,注意不能用純水保存柱子,而應(yīng)該用有機相(如甲醇)保存,因為純水易長霉。  流路堵塞問題:堵塞導(dǎo)致壓力太大,按預(yù)柱→混合器中的過濾器→管路過濾器→單向閥檢查,并清洗。清洗方法:①以民丙醇作溶劑沖洗②放在異丙醇中超聲波清洗③用10%稀硝酸清洗  11.緩沖鹽的使用:  流動相含有鹽分時,做完實驗后一定要進行流路沖洗;  首先用水沖洗,打開排液閥用PURG鍵轉(zhuǎn)換出原有含鹽的流動相,然后關(guān)閉排液閥打開泵沖洗全部流路45分鐘以上,如此更換流動相為水和甲醇混合液沖洗全部流路30分鐘(此步驟一般可省去,根據(jù)實驗而論),zui后更換純甲醇沖洗全部流路45分鐘以上?! ?2.泵頭沖洗;安捷倫液相色譜儀  用備件中的針頭和針管分別用蒸餾水和純甲醇沖洗3-5ml。  如流動相不含鹽,可對機器定期進行簡單的沖洗維護,根據(jù)實驗多少而定?! ∈謩舆M樣器沖洗;  同樣用備件中的針管和專用沖洗針頭對手動進樣器的裝載狀態(tài)和進樣狀態(tài)分別進行沖洗3-4ml的蒸餾水,然后再沖洗3-4ml的純甲醇。確保每次做完實驗,所有流路中充滿純甲醇! 這樣操作能夠延長液相色譜柱使用壽命

  液相色譜柱都是按照嚴格的標準生產(chǎn)和測試的,如能按照以下信息使用和維護色譜柱,不但能得到更佳的檢測結(jié)果,更能夠延長色譜柱的使用壽命。

安捷倫液相色譜儀HPLC的日常維護及保養(yǎng)及使用方法(圖1)

  色譜柱的安裝:

  1、首先應(yīng)確認柱和儀器的接頭以及管路是否匹配。為減少死體積,進樣閥、柱子、檢測器之間的連接管路內(nèi)徑盡可能使用內(nèi)徑較小的管線,同時控制進樣器、色譜柱和檢測器之間連接管線的長度。安裝色譜柱之前,確認流路系統(tǒng)中的溶劑是否正常。對分析較復(fù)雜的樣品建議安裝保護柱。

  2、為了使色譜柱與儀器系統(tǒng)達的連接效果,應(yīng)盡量使用與色譜柱接口相匹配的螺帽和錐形接頭,如原來的接頭長期匹配其他類型的色譜柱,建議在連接新色譜柱前應(yīng)檢查匹配情況,避免造成色譜柱的損壞或因色譜柱不匹配造成的漏液。

  3、使用PEEK材料的通用接頭,只需用手擰緊不需要特定扳手,使用壓力為5000psi;使用溫度不得超過100℃。

  流動相平衡:

  1、在進行樣品檢測前,至少使用20倍柱體積流動相使色譜柱充分平衡。流動相一定要使用色譜級別的溶劑。如使用水相的緩沖液應(yīng)當天配制以保持新鮮避免細菌產(chǎn)生。

  2、流動相使用前需用微孔濾膜過濾,消除流動相中顆粒對色譜系統(tǒng)和色譜柱的損壞。緩沖液與其他流動相混合后應(yīng)重新過濾避免溶解度變化造成產(chǎn)生新的沉淀。不應(yīng)使用純水作為流動相沖洗C18色譜柱,以免柱性能損壞(添加5%的有機溶劑沖洗色譜柱,同時可以達到對緩沖鹽清洗的作用。還可以使色譜柱更容易平衡)。

  3、流動相需脫氣后使用,可避免因氣泡導(dǎo)致的泵和檢測器的工作不正常。如果測試時使用的流動相與色譜柱保存使用的流動相有較大區(qū)別,應(yīng)該使用過度分布的形式進行平衡。避免由于流動相的突然變化造成柱壓增加過大或流動相緩沖鹽結(jié)晶造成對色譜柱和儀器系統(tǒng)的損壞。正相色譜柱比反相色譜柱需要更長的平衡時間。

  樣品制備與操作:

  1、樣品應(yīng)當盡可能溶解在能與流動相相互溶的溶劑中。除特殊指明外,如使用強溶劑溶解樣品柱子的分辨率將可能降低。

  2、樣品溶液在進樣前應(yīng)使用針頭式過濾器對樣品預(yù)先過濾。頻繁改變流動相組成,會加速降低柱效。

  3、色譜柱由高壓勻漿法裝填,能承受較高壓力。為獲得分離效果,使用時請不要超過200kgf,而且避免壓力突然上升或變化,否則會造成硅膠填料的破壞,減少色譜柱的使用壽命。除特殊要求外操作溫度不要超過60℃。

  保存色譜柱:

  1、如果流動相含有酸或無機鹽,應(yīng)當先用去離子水(20倍柱體積)沖洗干凈。然后用用100%乙腈或甲醇保存色譜柱。最后用柱子的接頭密封,并放在穩(wěn)定的環(huán)境中存放。

  2、應(yīng)避免色譜柱受到直接的機械沖擊或摔落,避免造成色譜柱性能的降低。

  色譜柱的再生:

  1、用相當于20倍柱體積的溶劑按下列順序沖洗柱子,建議按柱子的箭頭方向沖洗,盡可能不反沖:沖洗時使用的的參考溶劑順序是水、甲醇、氯仿、異丙醇、甲醇。


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