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大鼠雪旺細(xì)胞系RSC96

時(shí)間:2017/5/23閱讀:301
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摘要:觀察大鼠雪旺細(xì)胞系RSC96 細(xì)胞條件培養(yǎng)液(RSC96-CM)對(duì)少突膠質(zhì)前體細(xì)胞(OPCs)增殖的影響,探討其作用機(jī)制。

目的:觀察大鼠雪旺細(xì)胞系RSC96 細(xì)胞條件培養(yǎng)液(RSC96-CM)對(duì)少突膠質(zhì)前體細(xì)胞(OPCs)增殖的影響,探討其作用機(jī)制。

方法:應(yīng)用免疫粘附法從胚胎15d 的SD 大鼠脊髓分離OPCs,應(yīng)用BrdU 摻入實(shí)驗(yàn)檢測(cè)OPCs的增殖,應(yīng)用RT-PCR 技術(shù)檢測(cè)PDGF-AA和bFGF 在RSC96 細(xì)胞的表達(dá),應(yīng)用ELISA 技術(shù)檢測(cè)RSC96-CM 中PDGF-AA和bFGF 蛋白的濃度,以特異性抑制劑阻斷觀察PDGF-AA和bFGF 在RSC96-CM誘導(dǎo)OPCs 增殖中的作用,以特異性抑制劑觀察ERK和JNK信號(hào) 途徑在RSC96-CM誘導(dǎo)OPCs增殖中的作用。

結(jié)果:不同濃度的RSC96-CM培養(yǎng)的OPCs,其BrdU+細(xì)胞的比例與對(duì)照組相 比均顯著增加(P<0.05),其中,在含50% RSC96-CM 的培養(yǎng)液中培養(yǎng)的OPCs 的BrdU+細(xì)胞的比例達(dá)高峰。RT-PCR 證實(shí) RSC96 細(xì)胞顯著表達(dá)PDGF-AA和bFGF 的mRNAs,ELISA 結(jié)果發(fā)現(xiàn),RSC96-CM中PDGF-AA和bFGF 的蛋白濃度分別是 我們前期報(bào)道的B104CM中PDGF-AA和bFGF的蛋白水平的0.87 倍和0.92 倍。PDGFR的特異性抑制劑AG1295 和bFGFR 特異性抑制劑PD173074 均顯著降低RSC96-CM 誘導(dǎo)的OPCs 增殖;此外,Erk1/2 特異性抑制劑U0126 和JNK 特異性抑制 SP600125的預(yù)孵也顯著降低RSC96-CM誘導(dǎo)的BrdU+ OPCs的比例(P<0.01)。

結(jié)論:RSC96-CM顯著誘導(dǎo)OPCs的增殖,其通 過(guò)RSC96分泌的PDGF-AA和bFGF激活Erk1/2和JNK信號(hào)途徑而發(fā)揮作用;RSC96-CM也可以作為OPCs常規(guī)培養(yǎng)的擴(kuò)增劑。

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