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如何讓ELISA實(shí)驗系統(tǒng)更穩(wěn)定?

閱讀:465發(fā)布時間:2017-10-26

  ELISA檢測系統(tǒng)可以說是現(xiàn)在使用zui多的檢測方法,而且技術(shù)手段很多,對于花板,假陽性,全顯色,全部顯色,顯色比空缺還低,這些都起到了至關(guān)重要的作用,一定要多注意,那么elisa檢測系統(tǒng)穩(wěn)定,這些實(shí)驗過程都要注意。


  常用封suo劑有:0.05%-0.5%的BSA;10%的小牛血清或1%明膠;脫脂奶粉,比較價廉,可以高濃度使用(5%-10%);還有一些稀有用到的各種動物血清(主要為了排除相似蛋白干擾)和酪蛋白等等。詳細(xì)的試驗還要有堅固的理論外也要實(shí)踐,看一下*可不可以應(yīng)用到自己試驗當(dāng)中去。但*選用什么,要依據(jù)試驗詳細(xì)來實(shí)踐。


  應(yīng)留意以下原理:因為蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結(jié)合的,靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團(tuán)與固相載體表面的疏水基團(tuán)間的作用,這種物理吸附長短特異性的,受蛋白質(zhì)的分子量、等電點(diǎn)、濃度等的影響,大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)通常含有更多的疏水基團(tuán),故更易吸附到固相載體表面。小分子必需依賴和大的蛋白載體偶聯(lián)后才能固定在固相載體上。


  還有有的包被原可能不是蛋白,對于*和脂類物質(zhì)或小分子物質(zhì)我們要事先對其改造再加以包被,親和素*:先親和素先包被載體,加入*化的DNA,這種包被方法平均、牢固,已擴(kuò)大應(yīng)用于各種抗原物質(zhì)的定量測定。常用的包被液除了剛才提到的pH9.6碳酸鹽緩沖液,還有pH7.2的磷酸鹽緩沖液和pH7-8的Tris-HCL緩沖液等等。


  包被原的性質(zhì)很重要,蛋白濃度,是否降解,這關(guān)系到你做出的抗體可不可以被其識別,所以保留抗原很重要,我做重組蛋白時,師兄都嚴(yán)格警告我一定要在冰浴下緩慢融化就是這個道理。封suo就是讓大量不相關(guān)的蛋白質(zhì)充填這些曠地空閑,從而排斥ELISA后的步驟中干擾物質(zhì)的再吸附。但有時因為試驗的需要,包被原的特殊性也可能采用中性的緩沖溶液來包。


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