(一)原代細(xì)胞培養(yǎng)  
1、靜置貼壁細(xì)胞(包括半貼壁細(xì)胞的培養(yǎng))  
    凡經(jīng)消化液處理實(shí)體組織來源的細(xì)胞要通過充分漂洗，以盡量除去消化液的毒性，細(xì)胞接種時(shí)濃度要稍大一些，至少為5×108細(xì)胞/L，培養(yǎng)基可用Eagle(MEM)或DNEM培養(yǎng)，小牛血清濃度為10%～80%，有條件的應(yīng)在37℃ 5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，在起始的2天中盡量減少振蕩，以防止剛貼壁的細(xì)胞發(fā)生脫落，漂浮。若原代貼壁細(xì)胞不是用于長(zhǎng)期培養(yǎng)，只是用于分離繁殖或測(cè)定病毒之用，其細(xì)胞濃度可以加大，盡量貼成厚層以利病毒的效價(jià)提高和測(cè)定結(jié)果（如空斑）更加明顯、準(zhǔn)確，待細(xì)胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀，此時(shí)的pH若有明顯變化，應(yīng)將原代細(xì)胞換液，即倒去舊液，換入新鮮的培養(yǎng)基，以便除去衰老、死亡的細(xì)胞和陳舊的培養(yǎng)基，使貼壁細(xì)胞能獲得充足的營(yíng)養(yǎng)。  
若用骨髓或外周血中的懸浮細(xì)胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時(shí)，可有少量的肌樣纖維間質(zhì)細(xì)胞或基質(zhì)細(xì)胞開始貼壁生長(zhǎng)，為了利于該貼壁細(xì)胞充分貼壁和生長(zhǎng)，此時(shí)換液應(yīng)將細(xì)胞懸液經(jīng)低速離心后，按半量換液方式棄去舊液加入新液，然后再將細(xì)胞懸液放入原瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，經(jīng)反復(fù)幾次換液后，貼壁肌樣細(xì)胞逐漸形成網(wǎng)狀，此時(shí)換液可將原懸浮細(xì)胞和培養(yǎng)基移入另一新瓶，然后分別補(bǔ)加新鮮培養(yǎng)基(也按半量換液方式分別對(duì)半加入新液)繼續(xù)培養(yǎng)，原瓶的貼壁細(xì)胞逐漸長(zhǎng)成單層，而新瓶中又會(huì)出現(xiàn)二次貼壁細(xì)胞，經(jīng)幾次換液也會(huì)逐漸長(zhǎng)成單層，在此類細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)基中往往需加入少量的維生素D3、bFGF、地塞米松、小牛血清（濃度要在20%以上），以利細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)。  
2、懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)  
   凡來自外周血、胸腹水、脾臟、淋巴結(jié)、骨髓的淋巴細(xì)胞、造血干細(xì)胞以及白血病細(xì)胞，在原代培養(yǎng)時(shí)要盡量去除紅細(xì)胞。若作用于試驗(yàn)的短期培養(yǎng)，可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，細(xì)胞濃度可在5～8×109/L范圍內(nèi)，然后進(jìn)行分瓶試驗(yàn)。若要將淋巴細(xì)胞及白血病細(xì)胞進(jìn)行長(zhǎng)期培養(yǎng)，淋巴細(xì)胞中要加入生長(zhǎng)因子，白血病細(xì)胞中要加入少量的原患者血清，以利細(xì)胞生長(zhǎng)，待細(xì)胞開始增殖甚至結(jié)成小團(tuán)塊，培養(yǎng)基中pH變酸，說明細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖良好，一般每隔3天需半量換液一次（換液時(shí)盡量使細(xì)胞不丟失），待細(xì)胞增殖加快，濃度明顯增加，pH發(fā)生明顯變化時(shí)，此時(shí)可考慮傳代。但千萬不能急于傳代，一定要待細(xì)胞密度較高時(shí)才能進(jìn)行，以防傳代失敗。