ELISA試劑盒詳細(xì)操作流程如下：
（1）待測(cè)樣品孔中每孔參加待測(cè)樣品100μl，每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔；設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔，每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl；另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔，參加純細(xì)胞裂解液100μl。
（2）酶標(biāo)板置4℃，包被過夜。
（3）洗板：吸干孔內(nèi)反響液，用洗刷液過洗一遍（將洗刷液注滿板孔后，即甩去），以后將洗刷液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖擺。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗刷3-4次。
（4）陰性對(duì)照孔每孔參加PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔參加1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
（5）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。
（6）洗板，同（4）。
（7）每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
（8）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。
（9）洗板，同（4）。
（10）每孔加TMB顯色液 100μl，悄悄混勻10s，置37℃暗處反響15-20min。
（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反響。
（12）分別測(cè)450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，終究測(cè)得的OD值為兩者之差（W1-W2），以削減由容器上的劃痕或指印等形成的光攪擾。
（13）數(shù)據(jù)處理：在得出標(biāo)本（S）和陰性對(duì)照（N）的 OD值后，計(jì)算S/N值。S/N≥2.1為陽性斷定標(biāo)準(zhǔn)。
注ELISA試劑盒：所用溶液配方
（1） PBS：稱取0.2g KH2P04, 2.9g Na2HP04?12H20、8.0g NaCl, 0.2g KCl，加雙蒸水至1000ml。
（2）包被緩沖液：稱取1.59g Na2CO3, 2.938 NaHCO3，加雙蒸水至 1000m1。
（3）洗刷液（PBST）：含0.05% Tween-20的PBS。
（4）稀釋液：含0.1%牛血清白蛋白（BSA）的PBS，首要用以稀釋抗體、標(biāo)準(zhǔn)品、樣品。
（5）TMB顯色液：稱取1.84g Na2HP04.12H20, 0.51 g檸檬酸，加雙蒸水至1O0ml，配成檸檬酸-磷酸緩沖溶液。用10.5 ml 檸檬酸-磷酸緩沖溶液溶解1錠TMB，再參加35μl 3% H2O2
（6）ELISA試劑盒細(xì)胞裂解液：1% TritonX-100，137mmol/L NaCl，20mmol/L Tris-HCl，2mmol/L EDTA，1mmol/L PMSF，pH 7.4。（其間PMSF溶于異丙醇中，配成1O mmo/L，-20℃ 儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?/span>