細(xì)胞：CMT93細(xì)胞
中文名稱(chēng)：小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞
生長(zhǎng)特性：貼壁細(xì)胞
培養(yǎng)基：1640 培養(yǎng)基 血清：10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件：50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO
細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程( 請(qǐng)嚴(yán)格遵照無(wú)菌操作)
1. 吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS 緩沖液潤(rùn)洗細(xì)胞兩次，加 2-3 ml 0.25% 胰_酶進(jìn)行消化細(xì)胞(注意把握消化時(shí)間，通?？刂圃?1-2min)
2. 鏡下觀(guān)察消化情況，在細(xì)胞邊緣縮小，貼壁松動(dòng)時(shí)(不建議消化到細(xì)胞漂浮)去掉胰_酶，加 6~8ml 培養(yǎng)基，輕輕吹打細(xì)胞層，盡量把細(xì)胞層吹落，吹散。
3. 取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中，添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基，把細(xì)胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4. 注意培養(yǎng)基 PH 值變化情況，定期換液(每周 2-3 次)，待細(xì)胞密度達(dá)到 80%以后重復(fù) 1 項(xiàng)操作或凍存。
(網(wǎng)絡(luò)信息主針對(duì)網(wǎng)絡(luò)推廣作用，僅供參考，細(xì)胞培養(yǎng)請(qǐng)咨詢(xún)細(xì)胞庫(kù)管理員，以細(xì)胞庫(kù)管理員提供給您的信息為準(zhǔn)，操作前，如果有不明白之處，先咨詢(xún)細(xì)胞庫(kù)管理員，避免不必要的損失；)
采用體內(nèi)注射一氧化氮合酶(NOS)抑制劑zuo旋硝基精氨_酸甲基酯(L-NAME)和在體外培養(yǎng)基中分別加入L-NAME或次huang嘌呤以抑制卵母細(xì)胞自發(fā)成熟的3種模型, 研究了一氧化氮(NO)供體硝普_鈉(SNP)對(duì)小鼠卵母細(xì)胞體內(nèi)、外成熟的促進(jìn)作用.
結(jié)果表明:只有腹腔注射2.5 mg/kg SNP這一劑量組能顯著逆轉(zhuǎn)10 mg/kg L-NAME對(duì)卵母細(xì)胞第一極體(PB1)釋放的抑制作用(P < 0.05), 而高劑量SNP (10 mg/kg)使小鼠在注射藥物半小時(shí)后全部死亡;
10-7, 10-6和10-5 mol/L濃度的SNP能顯著促進(jìn)由4 mmol/L次huang嘌呤抑制的卵丘卵母細(xì)胞復(fù)合體(CEO)中卵母細(xì)胞的體外成熟, 而10-3, 10-4, 10-8 mol/L SNP對(duì)CEO中卵母細(xì)胞的體外成熟無(wú)影響;
最適濃度的SNP(10-5和10-6 mol/L)不影響裸卵(DO)的體外成熟;
10-3 mol/L L-NAME能顯著抑制CEO PB1的釋放, 但對(duì)生發(fā)泡破裂(GVBD)無(wú)影響, 而10-5 mol/L SNP能顯著逆轉(zhuǎn)其抑制.結(jié)果提示, 卵丘細(xì)胞產(chǎn)生的生理劑量的NO可以促進(jìn)體內(nèi)、外卵母細(xì)胞的成熟.
