細(xì)胞：BT-474細(xì)胞
中文名稱：人乳腺導(dǎo)管瘤細(xì)胞
生長(zhǎng)特性：貼壁細(xì)胞
培養(yǎng)基：1640 培養(yǎng)基 血清：10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件：50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO
細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程( 請(qǐng)嚴(yán)格遵照無(wú)菌操作)
1. 吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS 緩沖液潤(rùn)洗細(xì)胞兩次，加 2-3 ml 0.25% 胰_酶進(jìn)行消化細(xì)胞(注意把握消化時(shí)間，通常控制在 1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況，在細(xì)胞邊緣縮小，貼壁松動(dòng)時(shí)(不建議消化到細(xì)胞漂浮)去掉胰_酶，加 6~8ml 培養(yǎng)基，輕輕吹打細(xì)胞層，盡量把細(xì)胞層吹落，吹散。
3. 取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中，添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基，把細(xì)胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4. 注意培養(yǎng)基 PH 值變化情況，定期換液(每周 2-3 次)，待細(xì)胞密度達(dá)到 80%以后重復(fù) 1 項(xiàng)操作或凍存。
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血小板的壽命由Bcl-xL決定
血小板是血液細(xì)胞的一個(gè)片段，也是一個(gè)非典型細(xì)胞，因?yàn)槠洳痪哂屑?xì)胞核。
雖不具有細(xì)胞核，但是發(fā)現(xiàn)，血小板內(nèi)部其實(shí)也有一個(gè)“定時(shí)zhadan”，已預(yù)先決定了血小板的壽命。
服用化療藥的病人特別需要注射血小板，以彌補(bǔ)凝血功能的缺失，因?yàn)檫@些抗癌藥會(huì)影響骨髓制造血小板的質(zhì)量。
還有一個(gè)尚未理清的難題，那些受贈(zèng)的血小板必需在室溫下貯存，若在冷藏溫度下貯放，將引發(fā)接受者的免疫反應(yīng)，血小板將很快地被視為外來(lái)物，最后全部被清除。
血小板貯放在室溫會(huì)很快就喪失活性，也會(huì)有微生物污染等問(wèn)題。以人類為例，體內(nèi)的血小板壽命只有短短不到十天，而抽出后的血小板存放期則低于五天。
為了更了解血小板的生命期限，研究人員使用致突變劑來(lái)篩選產(chǎn)生低量血小板的小鼠，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Bcl-xL缺陷鼠的血小板含量極低。
在Bcl-xL缺陷鼠的研究模式中，研究人員起先懷疑，缺乏Bcl-xL蛋白的小鼠其骨髓可能無(wú)法制造血小板，但后來(lái)發(fā)現(xiàn)這個(gè)推論是錯(cuò)誤的， Bcl-xL的主要功能是維持血小板的壽命，就像它在其它細(xì)胞的功能一樣。
研究人員發(fā)現(xiàn)Bcl-xL會(huì)迫使促血小板死亡的Bak蛋白zisha，以維持血小板的生命，而當(dāng)Bcl-xL被降解后，血小板才會(huì)走向自然凋亡的境地。
遺傳缺陷或藥物治療導(dǎo)致Bcl-xL的活性缺乏，間接導(dǎo)致血小板的壽命縮短，使病人的凝血機(jī)制受到影響，但若將Bak蛋白的活性消除，就能恢復(fù)這個(gè)缺陷，這也是為何Bak缺陷小鼠活得比較久的原因。
除了了解血小板的壽命是由Bcl-xL來(lái)決定外，目前研究人員也準(zhǔn)備用BH3類似物的抗癌藥，將目標(biāo)蛋白Bcl-xL的表現(xiàn)量減少，希望藉此能看到腫瘤細(xì)胞也走入細(xì)胞自然凋亡之路。
