細(xì)胞：ZR-75-1細(xì)胞
中文名稱：人乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞
生長(zhǎng)特性：貼壁細(xì)胞
培養(yǎng)基：1640 培養(yǎng)基 血清：10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件：50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO
細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程( 請(qǐng)嚴(yán)格遵照無(wú)菌操作)
1. 吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS 緩沖液潤(rùn)洗細(xì)胞兩次，加 2-3 ml 0.25% 胰_酶進(jìn)行消化細(xì)胞(注意把握消化時(shí)間，通常控制在 1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況，在細(xì)胞邊緣縮小，貼壁松動(dòng)時(shí)(不建議消化到細(xì)胞漂浮)去掉胰_酶，加 6~8ml 培養(yǎng)基，輕輕吹打細(xì)胞層，盡量把細(xì)胞層吹落，吹散。
3. 取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中，添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基，把細(xì)胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4. 注意培養(yǎng)基 PH 值變化情況，定期換液(每周 2-3 次)，待細(xì)胞密度達(dá)到 80%以后重復(fù) 1 項(xiàng)操作或凍存。
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揭示體細(xì)胞重編程染色質(zhì)動(dòng)態(tài)變化規(guī)律
核小體作為染色質(zhì)的基本功能單位，主要由組蛋白八聚體及纏繞在組蛋白八聚體上的核心DNA序列組成。
組蛋白上能發(fā)生關(guān)鍵的表觀遺傳修飾，進(jìn)而調(diào)控特定基因的表達(dá)。
以往研究描繪了全基因組范圍內(nèi)的核小體定位圖譜，但對(duì)體細(xì)胞重編程過(guò)程中核小體的動(dòng)態(tài)變化及對(duì)基因表達(dá)調(diào)控的影響研究較少。
研究人員利用MEF、pre-iPSC和iPSC重編程三個(gè)階段的細(xì)胞作為模型，描繪了重編程過(guò)程中核小體定位及組蛋白修飾的動(dòng)態(tài)變化及對(duì)基因表達(dá)的影響。
在體細(xì)胞重編程過(guò)程中，pre-iPS細(xì)胞的染色質(zhì)最為開(kāi)放。在重編程過(guò)程中，核小體及不同組蛋白甲基化修飾在基因的啟動(dòng)子區(qū)發(fā)生有規(guī)律的動(dòng)態(tài)變化，這和基因表達(dá)水平密切相關(guān)。
最后，在pre-iPS細(xì)胞轉(zhuǎn)化為iPS細(xì)胞的過(guò)程中，維生素_C能夠顯著影響核小體及組蛋白甲基化修飾在重編程相關(guān)基因啟動(dòng)子區(qū)的重定位。
