細胞:WI-38細胞
中文名稱:人胚肺細胞
生長特性:貼壁細胞
培養(yǎng)基:MEM+10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件:50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO
細胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程( 請嚴格遵照無菌操作)
1. 吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,PBS 緩沖液潤洗細胞兩次,加 2-3 ml 0.25% 胰_酶進行消化細胞(注意把握消化時間,通常控制在 1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況,在細胞邊緣縮小,貼壁松動時(不建議消化到細胞漂浮)去掉胰_酶,加 6~8ml 培養(yǎng)基,輕輕吹打細胞層,盡量把細胞層吹落,吹散。
3. 取部分細胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中,添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基,把細胞懸液打勻,于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4. 注意培養(yǎng)基 PH 值變化情況,定期換液(每周 2-3 次),待細胞密度達到 80%以后重復(fù) 1 項操作或凍存。
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人的胚胎干細胞能夠無限自我更新并具有分化全能性,即在體外特定培養(yǎng)條件下能夠分化為來自三胚層的各種細胞類型,因而為疾病的細胞治療提供了新的希望。
目前,人的胚胎干細胞和誘導(dǎo)性多能干細胞已經(jīng)成功地被應(yīng)用于神經(jīng)系統(tǒng)各類細胞的定向分化
例如神經(jīng)干/祖細胞和神經(jīng)元等,為神經(jīng)系統(tǒng)疾病的細胞治療奠定了基礎(chǔ)。
然而要高效安全地實現(xiàn)hESCs和hNPCs的定向分化,充分利用hESCs和hNPCs的潛能,首先必須清楚地認識hESCs和hNPCs自我更新和特性維持的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。
ESCs和NPCs有一個共同的命運決定因子SOX2,它既維持ESCs自我更新又能促進神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育和NPCs的維持,因其功能多樣性而備受科研界的矚目。
Sox2對于小鼠胚胎的存活,滋養(yǎng)層和內(nèi)細胞團的分離,小鼠ESCs的建系和體外培養(yǎng)維持有著不可或_缺的作用,同時它還能促進神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育,維持大腦內(nèi)的NSCs/NPCs數(shù)目,保證神經(jīng)元正常分化。
然而長期以來,大部分的研究都將研究范疇局限于Sox2在模式動物ESCs和神經(jīng)系統(tǒng)(Nervous System)中的功能
而關(guān)于這一重要的核心全能性因子在hESCs和hESCs分化而來的hNPCs中的功能和作用機制研究甚少且存在爭議,且SOX2是如何促進ESCs向神經(jīng)分化的,其促神經(jīng)下游基因有哪些都是亟待回答的重要問題。