細胞:A9細胞
中文名稱:小鼠皮下結(jié)締組織細胞
生長特性:貼壁細胞
培養(yǎng)基:1640 培養(yǎng)基 血清:10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件:50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO
細胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程( 請嚴格遵照無菌操作)
1. 吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,PBS 緩沖液潤洗細胞兩次,加 2-3 ml 0.25% yi酶進行消化細胞(注意把握消化時間,通常控制在 1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況,在細胞邊緣縮小,貼壁松動時(不建議消化到細胞漂浮)去掉yi酶,加 6~8ml 培養(yǎng)基,輕輕吹打細胞層,盡量把細胞層吹落,吹散。
3. 取部分細胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中,添加適當?shù)呐囵B(yǎng)基,把細胞懸液打勻,于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4. 注意培養(yǎng)基 PH 值變化情況,定期換液(每周 2-3 次),待細胞密度達到 80%以后重復(fù) 1 項操作或凍存。
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電壓門控鉀離子通道是分布類型最多的一類離子通道,它存在于所有的真核細胞內(nèi),主要參與細胞膜靜息電位和動作電位復(fù)極化過程的調(diào)節(jié),決定著動作電位的發(fā)放頻率和幅度。(人MG63細胞 來源:通派細胞庫 人骨肉瘤細胞)
鉀通道是大約50個基因編碼的α亞單位的聚合物,單個鉀通道是同源四聚體,4個亞基對稱的圍成一個傳導(dǎo)離子的中央孔道,恰好讓單個鉀離子通過。(人143B細胞 來源:通派細胞庫 人骨肉瘤細胞)
心臟和內(nèi)耳中的鈉離子通道是由KCNQ1(Q1)編碼的α亞基和KCNE1(E1)編碼的β亞單位組成。Q1和E1的遺傳性突變與心律失常和耳聾有關(guān)。(人CNE-1細胞 來源:通派細胞庫 人鼻咽癌細胞)
構(gòu)建一個鉀離子通道到底需要多少數(shù)量的KCNE1蛋白。理論上是1到14之間的任何一個值。這些通道是由2個E1構(gòu)建而成。對這個通道構(gòu)造的了解,是理解威脅生命的心臟疾病(例如心律失常)和治療這些疾病的藥物開發(fā)的關(guān)鍵所在。(人SUNE-2細胞 來源:通派細胞庫 人鼻咽癌細胞)
一次單一的心跳是心臟肌肉緩慢的擴張和收縮。在某種程度上,心跳可以受心臟細胞表面的一系列通道控制,這些通道能夠調(diào)控不同離子進出細胞的運動。(小鼠4T1細胞 來源:通派細胞庫 小鼠乳癌細胞)
鉀離子通道,是由蛋白Q1和E1組成,對于結(jié)束每一次心臟收縮是至關(guān)重要的。Q1構(gòu)建鉀離子流經(jīng)的孔道,E1s控制這個孔道如何緩慢的打開和關(guān)閉、每個細胞表面有多少通道以及它們?nèi)绾伪凰幬镎{(diào)控。(猴CV-1細胞 來源:通派細胞庫 非洲綠猴腎細胞)
研究小組以超高的檢測靈敏度,在哺乳動物活細胞內(nèi)觀察到了E1,計算了單個通道中的蛋白質(zhì),而在這個研究領(lǐng)域中這些事情從來沒有做過。(猴Cos7細胞 來源:通派細胞庫 非洲綠猴SV40轉(zhuǎn)化的腎細胞)
使用三種不同的方法來計算E1,包括用不同的熒光染料標注它們,以及使用一種蝎毒素結(jié)合Q1。在每種方法中,都得到了相同的結(jié)果。(人THP-1細胞 來源:通派細胞庫 人單核細胞白血病細胞)
結(jié)果表明,具有高水平E1的細胞中的鉀離子通道,E1亞單位不超過2個。具有低水平E1的細胞產(chǎn)生的鉀離子通道(2個E1亞單位)和Q1通道(沒有E1亞基)——具有1個E1亞基的通道似乎不能形成或被限制不能在細胞表面表達。