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P3X63Ag8.653（小鼠骨髓瘤細胞）

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更新時間：2016-11-28 15:04:43瀏覽次數(shù)：188次

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產(chǎn)品簡介

P3X63Ag8.653（小鼠骨髓瘤細胞）的處理方法：
1. 先從外包裝盒拿出離心管，在離心管表面噴一層酒精，并小心去掉封口膜；
2. 將離心管中的細胞在超凈工作臺內(nèi)取出一部分進行細胞計數(shù)（詳見細胞凍存）。
3. 如細胞密度小于3×106/ml，可直接將離心管中的細胞轉(zhuǎn)移到T25瓶中，置于37°C，5% CO2的培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。

詳細介紹

細胞名稱：P3X63Ag8.653 小鼠骨髓瘤細胞

組織來源：B淋巴細胞；漿細胞；骨髓瘤

培養(yǎng)條件：RPMI-1640 +10% FBS

形　　態(tài)：懸浮；淋巴母細胞

背　　景：這株細胞能抗8-氮雜*但對HAT敏感。可以用作雜交瘤時的融合配體。能生成但不分泌免疫球蛋白。據(jù)報道它是由于缺失了3-酮類固醇還原酶活性的*營養(yǎng)缺陷型。

P3X63Ag8.653(小鼠骨髓瘤細胞)“一代”指從細胞接種到分離再培養(yǎng)的一段期間，與細胞世代或倍增不同。在一代中，細胞培增3～6次。細胞傳代后，一般經(jīng)過三個階段：游離期、指數(shù)增生期和停止期。常用細胞分裂指數(shù)表示細胞增殖的旺盛程度，即細胞群的分裂相數(shù)／100個細胞。一般細胞分裂指數(shù)介于0.2％～0.5％，腫瘤細胞可達3～5％。接種2～3天分裂增殖旺盛，是活力時期，稱指數(shù)增生期(對數(shù)生長期)，適宜進行各種試驗。

formazan結(jié)晶的生成量僅與活P3X63Ag8.653(小鼠骨髓瘤細胞)數(shù)目成正比（死細胞中琥珀酸脫氫酶消失，不能將MTT還原）。還原生成的formazan結(jié)晶可在含50%的N,N-二甲基甲酰胺和20%的十二甲基磺酸鈉（pH 4.7）的MTT溶解液中溶解，利用酶標(biāo)儀測定490 nm處的光密度OD值，以反映出活細胞數(shù)目。也可以用DMSO來溶解。MTT粉末和溶液保存時都需要避光，用鋁箔紙包好就可以。實驗的時候一般關(guān)閉超凈臺上的日光燈來避光，覺得這樣比較好。

1.接種：用含10％胎小牛血清得培養(yǎng)液配成單個細胞懸液，以每孔1000－10000個接種到96孔板，每孔體積200ul.

2.P3X63Ag8.653(小鼠骨髓瘤細胞)培養(yǎng)：同一般培養(yǎng)條件，培養(yǎng)3－5天（可根據(jù)試驗?zāi)康暮鸵鬀Q定培養(yǎng)時間）。

3.呈色：培養(yǎng)3－5天后，每孔加MTT溶液（5mg/ml用PBS 配)20ul.

繼續(xù)孵育4小時，終止培養(yǎng)，小心吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液，對于懸浮需要離心后再吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液。每孔加150ul DMSO，振蕩10分鐘，使結(jié)晶物充分融解。

4.比色：選擇490nm波長，在酶聯(lián)免疫監(jiān)測儀上測定各孔光吸收值，記錄結(jié)果，以時間為橫坐標(biāo)，吸光值為縱坐標(biāo)繪制P3X63Ag8.653(小鼠骨髓瘤細胞)生長曲線。

關(guān)鍵詞：酶標(biāo)儀