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NCTC 1469（小鼠正常肝細(xì)胞）

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

NCTC 1469（小鼠正常肝細(xì)胞）的處理方法：
1. 先從外包裝盒拿出離心管，在離心管表面噴一層酒精，并小心去掉封口膜；
2. 將離心管中的細(xì)胞在超凈工作臺(tái)內(nèi)取出一部分進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)（詳見細(xì)胞凍存）。
3. 如細(xì)胞密度小于3×106/ml，可直接將離心管中的細(xì)胞轉(zhuǎn)移到T25瓶中，置于37°C，5% CO2的培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。

詳細(xì)介紹

細(xì)胞名稱：NCTC 1469 小鼠正常肝細(xì)胞

培養(yǎng)條件：DMEM +10% horse serum

形　　態(tài)：貼壁；上皮細(xì)胞樣

背　　景：1952年建系，源于正常C3H/An小鼠的肝臟組織，表達(dá)H-2K抗原,鼠痘病毒陰性。

NCTC 1469(小鼠正常肝細(xì)胞)“一代”指從細(xì)胞接種到分離再培養(yǎng)的一段期間，與細(xì)胞世代或倍增不同。在一代中，細(xì)胞培增3～6次。細(xì)胞傳代后，一般經(jīng)過三個(gè)階段：游離期、指數(shù)增生期和停止期。常用細(xì)胞分裂指數(shù)表示細(xì)胞增殖的旺盛程度，即細(xì)胞群的分裂相數(shù)／100個(gè)細(xì)胞。一般細(xì)胞分裂指數(shù)介于0.2％～0.5％，腫瘤細(xì)胞可達(dá)3～5％。接種2～3天分裂增殖旺盛，是活力時(shí)期，稱指數(shù)增生期(對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期)，適宜進(jìn)行各種試驗(yàn)。

formazan結(jié)晶的生成量?jī)H與活NCTC 1469(小鼠正常肝細(xì)胞)數(shù)目成正比（死細(xì)胞中琥珀酸脫氫酶消失，不能將MTT還原）。還原生成的formazan結(jié)晶可在含50%的N,N-二甲基甲酰胺和20%的十二甲基磺酸鈉（pH 4.7）的MTT溶解液中溶解，利用酶標(biāo)儀測(cè)定490 nm處的光密度OD值，以反映出活細(xì)胞數(shù)目。也可以用DMSO來溶解。MTT粉末和溶液保存時(shí)都需要避光，用鋁箔紙包好就可以。實(shí)驗(yàn)的時(shí)候一般關(guān)閉超凈臺(tái)上的日光燈來避光，覺得這樣比較好。

1.接種：用含10％胎小牛血清得培養(yǎng)液配成單個(gè)細(xì)胞懸液，以每孔1000－10000個(gè)接種到96孔板，每孔體積200ul.

2.NCTC 1469(小鼠正常肝細(xì)胞)培養(yǎng)：同一般培養(yǎng)條件，培養(yǎng)3－5天（可根據(jù)試驗(yàn)?zāi)康暮鸵鬀Q定培養(yǎng)時(shí)間）。

3.呈色：培養(yǎng)3－5天后，每孔加MTT溶液（5mg/ml用PBS 配)20ul.

繼續(xù)孵育4小時(shí)，終止培養(yǎng)，小心吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液，對(duì)于懸浮需要離心后再吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液。每孔加150ul DMSO，振蕩10分鐘，使結(jié)晶物充分融解。

4.比色：選擇490nm波長(zhǎng)，在酶聯(lián)免疫監(jiān)測(cè)儀上測(cè)定各孔光吸收值，記錄結(jié)果，以時(shí)間為橫坐標(biāo)，吸光值為縱坐標(biāo)繪制NCTC 1469(小鼠正常肝細(xì)胞)生長(zhǎng)曲線。

關(guān)鍵詞：酶標(biāo)儀