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公司動(dòng)態(tài)

G.靈芝原生質(zhì)體的制備與再生

閱讀：764發(fā)布時(shí)間：2018-1-23

G.靈芝原生質(zhì)體的制備與再生

實(shí)驗(yàn)試劑

溶壁酶

*的PDB肉湯

MYG瓊脂培養(yǎng)基

實(shí)驗(yàn)設(shè)備

搖床

培養(yǎng)箱

實(shí)驗(yàn)步驟

1. 將菌絲體接種到含100 mL的PDB介質(zhì)的容積250 mL瓶中（200g土豆，20g葡萄糖，1L水）。

2. 恒溫28°C避光培養(yǎng)菌絲體，保持培養(yǎng)箱以50轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速持續(xù)搖動(dòng)。

3. 將培養(yǎng)物無(wú)菌紗布過(guò)濾滅菌。

4. 取大約5g菌絲體放于容積為50 mL 的試管中，試管中含20 mL已過(guò)濾滅菌的1.5％溶壁酶和0.6 M*（廣東省微生物研究所，中國(guó)）。

5. 然后30℃孵育2h，期間不時(shí)攪拌。

6. 2 h后取出菌絲片段，放于MYG瓊脂培養(yǎng)基中（2％麥芽提取物，0.2％酵母提取物，2％葡萄糖，1.5％瓊脂），用于靈芝原生質(zhì)體再生。

7. 稀釋原生質(zhì)體懸浮至濃度為1×10 4細(xì)胞/毫升，取50μL稀釋后的原生質(zhì)體懸浮液接種于MYG培養(yǎng)基中，25°C，避光培養(yǎng)。


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