免疫PCR注意事項(xiàng)
免疫PCR注意事項(xiàng)實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵步驟是獲得適當(dāng)?shù)目贵w-DNA復(fù)合物。用鏈親和素將*標(biāo)記的抗體與*標(biāo)記的DNA偶聯(lián)的方法，因每個(gè)鏈親和素分子可與四個(gè)*分子結(jié)合，因此要優(yōu)化反應(yīng)條件，以使得每個(gè)鏈親和素分子既能結(jié)合上抗體分子，又能結(jié)合上DNA。
此外，還可用化學(xué)方法將DNA與抗體分子共價(jià)偶聯(lián)，即將抗體分子和5’端氨基酸修飾的DNA分別用不同的雙功能偶聯(lián)劑激活，然后通過自發(fā)的反應(yīng)偶聯(lián)到一起，比如，用N-Succinimidyl-S-acetyl thioacetate(SATA)活化氨基修飾的DNA，用Sulfo-Succinimidyl 4-(maleimidomethyl) Cyclohexane-1-Carboxylate(Sulfo-SMCC)修飾抗體分子，然后將二者在一小管中混合，通過加入鹽酸胲（Hydroxylamine hydrochloride）使二者偶聯(lián)在一起。
免疫PCR具有高敏感性。因此，抗體和標(biāo)記DNA的任何非特異性結(jié)合均可導(dǎo)致嚴(yán)重的本底問題。因而在加入抗體和標(biāo)記DNA后必須盡可能*地清洗。即使有些特異性結(jié)合的抗體或標(biāo)記DNA被洗掉了，亦可在zui后通過增加PCR的循環(huán)次數(shù)得到彌補(bǔ)。此外，應(yīng)用有效的封閉劑對(duì)防止非特異性結(jié)合也是非常重要的。可用脫脂奶粉和牛血清白蛋白做蛋白封閉劑，用魚精DNA做核酸封閉劑。防止本底信號(hào)的另一個(gè)重要因素是控制污染，這也是所有敏感的檢測(cè)系統(tǒng)存在的問題。即使每一步試驗(yàn)都做得非常認(rèn)真，重復(fù)使用同樣的引物和標(biāo)記DNA均會(huì)產(chǎn)生假陽性信號(hào)。
免疫PCR的一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是標(biāo)記DNA序列*是人為選定。因此標(biāo)記DNA及其引物可經(jīng)常變換，以避免由于污染造成的假陽性信號(hào)。
免疫PCR可以檢測(cè)到常規(guī)免疫學(xué)方法無法檢測(cè)的樣品。因此，應(yīng)用免疫PCR可在微觀水平（單細(xì)胞）檢測(cè)抗原，定量PCR產(chǎn)物可以估計(jì)某一標(biāo)本中的抗原數(shù)量，在臨床診斷中可在疾病早期抗原量很低時(shí)檢測(cè)到微量的抗原。
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