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植物血凝素的制備方法

閱讀：646發(fā)布時間：2017-5-9

植物血凝素的制備方法

植物血凝素也稱為植物凝集素（PHA），可自制也可購自商品。自制的方法常用生理鹽水提取法。
（A）干品制備法（1）選廣東雞子豆10g，用蒸餾水沖洗，置培養(yǎng)皿內(nèi)用75%酒精一次性浸洗，倒掉酒精留間隙置37℃。恒溫箱內(nèi)24-48小時；（2）在無菌條件下研碎雞子豆，加生理鹽水30ml，搖勻后放入4℃冰箱24小時，第二天再加生理鹽水70ml，再置4℃冰箱內(nèi)24小時。每8-12小時搖蕩一次。（也可一次性加100ml生理鹽水）；（3）無菌條件下移入10-50ml離心管內(nèi)，3000-4000rpm30分鐘。在無菌箱內(nèi)把上清液分裝于10ml小瓶，置冰箱冷凍層備用；（4）效價：外周血染色體制備每100ml培養(yǎng)基加PHA約2ml。注：若整個過程未在無菌條件下進(jìn)行，分裝時用G5玻砂漏斗除菌即可。
（B）鮮品制備法：（1）選擇完整無破皮鮮菜豆20g，用75%酒精浸泡10分鐘；（2）在凈化工作中用無菌鹽水或蒸餾水漂洗二次，然后置無菌乳缽中搗成糊狀，用100ml無菌鹽水浸泡封口；（3）移入4℃冰箱中置24小時，中間搖動數(shù)次，次日3000rpm30分鐘，在無菌情況下分裝上清液于10ml小瓶內(nèi)，置冰箱冷凍層備用。（4）效價：正式使用前先用一定量作效價測定，按效價使用。


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