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免疫酶技術(shù)是將抗原抗體反應(yīng)的特異性與酶的催化作用有機結(jié)合的一種方法。它以酶作為標(biāo)記物,與抗體或抗原聯(lián)結(jié),與相應(yīng)的抗原或抗體作用后,通過底物的顏色反應(yīng)作抗原抗體的定性和定量,亦可用于組織中抗原或抗體的定位研究,即酶免疫組織化學(xué)技術(shù)。
目前應(yīng)用zui多的免疫酶技術(shù)是酶聯(lián)免疫吸附實驗(elisa),它是使抗原或抗體吸附于固相載體,使隨后進行的抗原抗體反應(yīng)均在載體表面進行,從而簡化了分離步驟,提高了靈敏度,即可檢測抗原,也可檢測抗體。實驗方法包括間接法、夾心法及競爭法。
為了檢測抗原可用夾心法。將特異性抗體吸附在固相載體(聚苯乙烯制成的小管、小盤或小孔)上,然后加被測溶液,倘樣品中有相應(yīng)抗原,則與抗體在載體表面形成復(fù)合物。洗滌后加入酶標(biāo)記的特異性抗體,后者通過抗原也結(jié)合到載體的表面。洗去過剩的標(biāo)記抗體,加入酶的底物,在一定時間內(nèi)經(jīng)酶催化產(chǎn)生的有色產(chǎn)物的量與溶液中抗原含量成正比,可用肉眼觀察或分光光度計測定。
為了檢測抗體可用間接法。使抗原吸附于載體上,然后加入被測血清,如有抗體,則與抗原在載體上形成復(fù)合物。洗滌后加酶標(biāo)記的抗球蛋白(抗抗體)與之反應(yīng)。洗滌后加底物顯色,有色產(chǎn)物的量與抗體的量成正比。
常用的酶有辣根過氧化物酶(HRP)和堿性磷酸酶(AP),相應(yīng)的底物分別是鄰苯二胺(OPD)和對硝基苯磷酸鹽,前者呈色反應(yīng)為棕黃色,后者為藍(lán)色??捎媚繙y定性,也可用酶標(biāo)儀測定光密度(OD)值以反映抗原含量。
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