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Pierce™ 重組蛋白 G

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Pierce™ 重組蛋白 G

詳細(xì)介紹

在免疫檢測(cè)和抗體純化方案中，純化（未結(jié)合）Thermo Scientific Pierce 重組蛋白 G 可作為制備用于檢測(cè)或純化兔和人抗體（特別是 IgG 同種型）的各種探針或親和基質(zhì)的基礎(chǔ)。

重組蛋白 G 的特點(diǎn)：

?每個(gè)蛋白含有兩個(gè) Fc 結(jié)合結(jié)構(gòu)域
? 對(duì)于小鼠（包括 IgG1）、人（包括 IgG3）以及大鼠、山羊和?？贵w，優(yōu)于蛋白 A
? 對(duì)于豚鼠、豬、犬和貓，弱于蛋白 A
? 不結(jié)合人 IgM、IgD 或 IgA

蛋白 G 是一種從 G 群鏈球菌中分離得到的細(xì)菌細(xì)胞壁蛋白。天然蛋白 G 的 DNA 測(cè)序可鑒定兩個(gè) IgG 結(jié)合結(jié)構(gòu)域以及白蛋白和細(xì)胞表面結(jié)合位點(diǎn)。白蛋白和細(xì)胞表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域已從重組蛋白 G 中消除以減少非特異性結(jié)合，因此，可用于從粗樣品中分離 IgG。理想結(jié)合發(fā)生在 pH 5條件下，盡管在 pH 7.0 - 7.2條件下結(jié)合也有效。

重組蛋白 G 的性質(zhì)：
? 來(lái)源：大腸桿菌
? 分子量：～21,600（使用 SDS-PAGE 測(cè)量的表觀 MW：32,000）
?形式：無(wú)鹽粉末
? 0.1% 溶液的 A280：1.0
? 等電點(diǎn) (pI)：4.5

由于對(duì)于大多數(shù)哺乳動(dòng)物 IgG，蛋白 G 比蛋白 A 具有更高親和力，它可用于純化不能與蛋白 A 很好結(jié)合哺乳動(dòng)物 IgG。蛋白 G 與多個(gè) IgG 亞型（如人 IgG3、小鼠 IgG1 和大鼠 IgG2a）結(jié)合的容量明顯高于蛋白 A。但是，蛋白 G 不與人 IgM、IgD 和 IgA 結(jié)合。蛋白 A 和蛋白 G 之間的結(jié)合特性差異可通過(guò)各個(gè)蛋白的 IgG 結(jié)合位點(diǎn)的不同成分加以解釋。這些蛋白的三級(jí)結(jié)構(gòu)非常相似，盡管它們的氨基酸成分顯著不同。

報(bào)告的 IgG 與蛋白質(zhì) G 的結(jié)合特性存在不一致。蛋白 G 的分離和生產(chǎn)方法差異可能影響 IgG 結(jié)合，部分原因是在不同來(lái)源的蛋白 G 上存在不同數(shù)量的 IgG 結(jié)合位點(diǎn)。已使用天然蛋白 G 和多種不同的重組形式進(jìn)行了結(jié)合研究。已使用幾種測(cè)定方法來(lái)確定相對(duì)親和力，包括放射標(biāo)記實(shí)驗(yàn)和 ELISA 技術(shù)。親和測(cè)定的不同或許可以解釋部分的不一致。此外，使用不同的緩沖液時(shí)，會(huì)有明顯的結(jié)合差異。與20 mM Tris 緩沖液 (pH 7.5) 相比，當(dāng)使用蛋白 G 結(jié)合緩沖液時(shí)，與蛋白 G 結(jié)合的大鼠血清 IgG 約增加 44%。

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