蘇木素伊紅（HE）染色試劑盒

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述

蘇木素（Hematoxylin），也稱作蘇木精，蘇木色精，無色的蘇木素經(jīng)氧化后形成有醌環(huán)結(jié)構(gòu)的氧化蘇木素（Hematein），同媒染劑（常用的是三價鋁或鐵鹽）一起使用，形成有顏色的帶正電荷的復(fù)合物（如Hematein-Al³⁺ complexes），從而使細胞核著色。著色原理在于細胞核內(nèi)染色質(zhì)主要成分是DNA，DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)中雙鏈上的磷酸基向外，帶負電荷，呈酸性，很容易與帶正電荷的氧化蘇木素復(fù)合物以離子鍵或氫鍵結(jié)合而被染色。蘇木素染色液因配方的不同，將細胞核染色成不同深淺的藍色或藍紫色。

伊紅（Eosin Y）是一種化學(xué)合成的酸性染料，在一定條件下能使細胞漿著色。著色原理在于細胞漿的主要成分是蛋白質(zhì)，是一種兩性化合物，細胞漿的染色與染液的pH值有密切關(guān)系。當(dāng)染色液pH在胞漿蛋白質(zhì)等電點以下，蛋白質(zhì)以堿式電離呈正電荷，此時可被帶負電荷的酸性染料染色。伊紅在水中解離成帶負電荷的陰離子，與胞漿蛋白上帶正電荷的陽離子結(jié)合，使得胞漿著色。根據(jù)染色液配方的不同，將細胞漿染色成不同程度的紅色或粉紅色。

本蘇木素伊紅（HE）染色試劑盒（Hematoxylin-Eosin (HE) Stain Kit）綜合了多種經(jīng)典的HE染色法，例如Harris法、Mayer法等，簡化了操作步驟，縮短了操作時間，并且染色液內(nèi)不含、甲醇等有毒試劑。適用于組織石蠟切片、冰凍切片或培養(yǎng)細胞的染色等。蘇木素染色液可重復(fù)使用，直至認為效果不佳，再更換新的染色液。

產(chǎn)品組成

注意事項

1） 切片脫蠟應(yīng)盡量干凈；

2） 梯度濃度乙醇應(yīng)經(jīng)常更換新液；

3） 鹽酸乙醇分化雖為選做步驟，但分化后的核質(zhì)著色更清晰。鹽酸乙醇分化時間應(yīng)根據(jù)切片厚薄、組織類別以及新舊而定，另，分化后自來水沖洗時間應(yīng)足夠，以保證*清洗掉酸。

4） 冷凍切片染色時間盡量要短。

5） 一次使用本試劑盒建議先取1~2個樣品做預(yù)實驗。

6） 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

操作步驟

一、 需要自行準備的材料

1） 鹽酸乙醇分化液

2） 藍化液，比如0.2~1%稀氨水、0.1~1%*溶液、Scott促藍液等

3） 梯度濃度乙醇

4） 4%多聚甲醛（比如：MM1504-500ML）

5） 中性樹膠封片劑（比如：MM1503-100ML）

二、 染色流程（石蠟切片）

2.1 樣品處理

1）二甲苯脫蠟2次，每次5~10min；

2）（可選）無水乙醇作用2次，每次3~5min；

3）95%乙醇1次，3~5min；

4）90%乙醇1次，3~5min；

5）80%乙醇1次，3~5min；

6）自來水或蒸餾水沖洗1次，1~3min；

2.2 染色步驟

1）蘇木素染色液染色5~8min；

2）自來水或蒸餾水沖洗5~10s；

3）（可選）鹽酸乙醇分化2~5s；

4）自來水沖洗20~30s；

5）藍化液返藍20~40s；

6）自來水沖洗30~60s；

7）伊紅染色液染色3~5min；

8）自來水沖洗1~5s；

2.3 脫水、透明、封固

1）80%乙醇1次，10~20s；

2）90%乙醇1次，10~20s；

3）95%乙醇2次，每次1~2min；

4）無水乙醇2次，每次2~3min；

5）二甲苯透明3次，每次2~3min；

6）中性樹膠封片。

2.4 染色結(jié)果

細胞核呈藍色；

細胞質(zhì)、肌纖維、膠原纖維、甲狀腺膠質(zhì)等呈深淺不一的紅色；

角蛋白、紅細胞等呈明亮的橙紅色。

三、染色流程（冰凍切片）

3.1 染色步驟

1）乙迷-乙醇混合固定液固定5~10s；【注意】：乙迷-乙醇混合固定液由乙迷和95%乙醇等量混合而得，再加入適量乙酸，混合均勻后，需密封保存。

2）自來水沖洗2~5s；

3）蘇木素染色液染色1~2min（可加熱至50℃）；

4）自來水沖洗2~5s；

5）（可選）鹽酸乙醇分化2~5s；

6）自來水沖洗2~5s；

7）藍化液返藍2~5s；

8）自來水沖洗5~10s；

9）伊紅染色液染色2~5s；

10）自來水沖洗1~2s；

11）80%乙醇1次，1~2s；

12）95%乙醇1次，1~2s；

13）無水乙醇1次，2~5s；

14）*：二甲苯（1：3）2~5s；

15）二甲苯透明3次，每次2~5s；

16）中性樹膠封片。

3.2 染色結(jié)果

細胞核呈藍色；細胞質(zhì)、纖維呈紅色。

四、染色流程（培養(yǎng)細胞）

4.1 染色步驟

1）4%多聚甲醛固定10~20min；

2）自來水沖洗2次，每次2min；

3）蒸餾水沖洗2次，每次2min；

4）染色、脫蠟、透明、封固步驟同石蠟切片的染色方法，作用時間應(yīng)相應(yīng)縮短。

4.2 染色結(jié)果

細胞核呈藍色；細胞質(zhì)、纖維呈紅色。

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— —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】

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