蘇木素伊紅（HE）染色試劑盒

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述

蘇木素（Hematoxylin），也稱作蘇木精，蘇木色精，無色的蘇木素經(jīng)氧化后形成有醌環(huán)結構的氧化蘇木素（Hematein），同媒染劑（常用的是三價鋁或鐵鹽）一起使用，形成有顏色的帶正電荷的復合物（如Hematein-Al³⁺ complexes），從而使細胞核著色。著色原理在于細胞核內(nèi)染色質(zhì)主要成分是DNA，DNA雙螺旋結構中雙鏈上的磷酸基向外，帶負電荷，呈酸性，很容易與帶正電荷的氧化蘇木素復合物以離子鍵或氫鍵結合而被染色。蘇木素染色液因配方的不同，將細胞核染色成不同深淺的藍色或藍紫色。

伊紅（Eosin Y）是一種化學合成的酸性染料，在一定條件下能使細胞漿著色。著色原理在于細胞漿的主要成分是蛋白質(zhì)，是一種兩性化合物，細胞漿的染色與染液的pH值有密切關系。當染色液pH在胞漿蛋白質(zhì)等電點以下，蛋白質(zhì)以堿式電離呈正電荷，此時可被帶負電荷的酸性染料染色。伊紅在水中解離成帶負電荷的陰離子，與胞漿蛋白上帶正電荷的陽離子結合，使得胞漿著色。根據(jù)染色液配方的不同，將細胞漿染色成不同程度的紅色或粉紅色。

本蘇木素伊紅（HE）染色試劑盒（Hematoxylin-Eosin (HE) Stain Kit）綜合了多種經(jīng)典的HE染色法，例如Harris法、Mayer法等，簡化了操作步驟，縮短了操作時間，并且染色液內(nèi)不含、甲醇等有毒試劑。適用于組織石蠟切片、冰凍切片或培養(yǎng)細胞的染色等。蘇木素染色液可重復使用，直至認為效果不佳，再更換新的染色液。

產(chǎn)品組成

注意事項

1） 切片脫蠟應盡量干凈；

2） 梯度濃度乙醇應經(jīng)常更換新液；

3） 鹽酸乙醇分化雖為選做步驟，但分化后的核質(zhì)著色更清晰。鹽酸乙醇分化時間應根據(jù)切片厚薄、組織類別以及新舊而定，另，分化后自來水沖洗時間應足夠，以保證*清洗掉酸。

4） 冷凍切片染色時間盡量要短。

5） 一次使用本試劑盒建議先取1~2個樣品做預實驗。

6） 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

操作步驟

一、 需要自行準備的材料

1） 鹽酸乙醇分化液

2） 藍化液，比如0.2~1%稀氨水、0.1~1%*溶液、Scott促藍液等

3） 梯度濃度乙醇

4） 4%多聚甲醛（比如：MM1504-500ML）

5） 中性樹膠封片劑（比如：MM1503-100ML）

二、 染色流程（石蠟切片）

2.1 樣品處理

1）二甲苯脫蠟2次，每次5~10min；

2）（可選）無水乙醇作用2次，每次3~5min；

3）95%乙醇1次，3~5min；

4）90%乙醇1次，3~5min；

5）80%乙醇1次，3~5min；

6）自來水或蒸餾水沖洗1次，1~3min；

2.2 染色步驟

1）蘇木素染色液染色5~8min；

2）自來水或蒸餾水沖洗5~10s；

3）（可選）鹽酸乙醇分化2~5s；

4）自來水沖洗20~30s；

5）藍化液返藍20~40s；

6）自來水沖洗30~60s；

7）伊紅染色液染色3~5min；

8）自來水沖洗1~5s；

2.3 脫水、透明、封固

1）80%乙醇1次，10~20s；

2）90%乙醇1次，10~20s；

3）95%乙醇2次，每次1~2min；

4）無水乙醇2次，每次2~3min；

5）二甲苯透明3次，每次2~3min；

6）中性樹膠封片。

2.4 染色結果

細胞核呈藍色；

細胞質(zhì)、肌纖維、膠原纖維、甲狀腺膠質(zhì)等呈深淺不一的紅色；

角蛋白、紅細胞等呈明亮的橙紅色。

三、染色流程（冰凍切片）

3.1 染色步驟

1）乙迷-乙醇混合固定液固定5~10s；【注意】：乙迷-乙醇混合固定液由乙迷和95%乙醇等量混合而得，再加入適量乙酸，混合均勻后，需密封保存。

2）自來水沖洗2~5s；

3）蘇木素染色液染色1~2min（可加熱至50℃）；

4）自來水沖洗2~5s；

5）（可選）鹽酸乙醇分化2~5s；

6）自來水沖洗2~5s；

7）藍化液返藍2~5s；

8）自來水沖洗5~10s；

9）伊紅染色液染色2~5s；

10）自來水沖洗1~2s；

11）80%乙醇1次，1~2s；

12）95%乙醇1次，1~2s；

13）無水乙醇1次，2~5s；

14）*：二甲苯（1：3）2~5s；

15）二甲苯透明3次，每次2~5s；

16）中性樹膠封片。

3.2 染色結果

細胞核呈藍色；細胞質(zhì)、纖維呈紅色。

四、染色流程（培養(yǎng)細胞）

4.1 染色步驟

1）4%多聚甲醛固定10~20min；

2）自來水沖洗2次，每次2min；

3）蒸餾水沖洗2次，每次2min；

4）染色、脫蠟、透明、封固步驟同石蠟切片的染色方法，作用時間應相應縮短。

4.2 染色結果

細胞核呈藍色；細胞質(zhì)、纖維呈紅色。

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— —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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