F-DH5a Chemically Competent Cell 大腸桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

產(chǎn)品標(biāo)簽：

F-DH5a；F-*0；DH10B；JM109；EPI400；羧芐；卡那霉素；鏈霉素；

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產(chǎn)品組分：

菌株描述

DH5a菌株基因型：F-φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) U169 endA1 recA1 hsdR17(rk-,mk+) supE44λ- thi-1 gyrA96 relA1 phoA

產(chǎn)品描述

本品是大腸桿菌DH5a菌株經(jīng)特殊工藝制作所得的快速轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞，無(wú)需42℃熱激，37℃孵育步驟，只需冰浴，10min內(nèi)能完成轉(zhuǎn)化、涂板步驟。經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率可達(dá)1~5×108 cfu/μg DNA。且在-80℃能穩(wěn)定保存幾個(gè)月轉(zhuǎn)化效率不發(fā)生改變。

注意事項(xiàng)

5）   產(chǎn)品包裝內(nèi)含質(zhì)粒pUC19 DNA(10pg/μl)，供對(duì)照實(shí)驗(yàn)用。

6）   為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在無(wú)菌條件的標(biāo)準(zhǔn)下進(jìn)行】

一、  快速轉(zhuǎn)化操作（10min）

1.1    提前15min將用到的篩選培養(yǎng)平板拿到37℃預(yù)熱。

1.2    取F-DH5a感受態(tài)細(xì)胞從-80℃取出，迅速插入冰中，5min后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物），并用手彈打管底輕輕混勻，冰中靜置5min。

1.3    用移液槍將感受態(tài)細(xì)胞-DNA混合物轉(zhuǎn)移到37℃預(yù)熱的LB篩選培養(yǎng)平板上，用無(wú)菌的涂布棒將細(xì)胞均勻涂開，表面無(wú)水漬。

1.4    將平板倒置于37℃過(guò)夜培養(yǎng)。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選，至少培養(yǎng)15h。

【注意】：F-DH5a感受態(tài)細(xì)胞涂含氨芐或羧芐篩選培養(yǎng)平板時(shí)效率搞，若涂卡那霉素或其他抗生素平板，轉(zhuǎn)化效率會(huì)下降（由于沒(méi)有孵育步驟，卡那霉素等對(duì)菌體毒性較大）。若要提高卡那霉素或其他抗性質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化效率，按照快速熱激轉(zhuǎn)化操作。

二、  快速熱激轉(zhuǎn)化操作（25min，能提高轉(zhuǎn)化效率）

【注意】：當(dāng)質(zhì)粒＞7kb，通過(guò)以下熱激轉(zhuǎn)化操作：取F-DH5a感受態(tài)細(xì)胞從-80℃取出，迅速插入冰中，5min后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物），并用手管底輕輕混勻，冰中靜置20min。

42℃水浴熱激45s，迅速放回冰上并靜置2min。加入700μl 無(wú)菌的LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃ 搖床，200 rpm振蕩培養(yǎng)30min。之后涂板。

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 — —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】

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F-DH5a化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

F-DH5a化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞