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W-TMB顯色試劑 子科現貨供應
英文名:W-TMB
相關類別:Western Blot
儲存:常溫下運輸,收到后,將所有溶液2-8℃情況下保存,保質期為一年
W-TMB顯色試劑 子科現貨供應產品簡介
TMB的全稱為3,3,5,5-四甲基聯苯胺,為無色物質,作為供氫體,在辣根過氧化物酶作用下,被氧化的情況下,產生有蘭色的產物,在特殊試劑的作用下沉淀在膜上,主要吸收峰在370 nm和652 nm,比色方便,是HRP結合物zui常用的底物,在免疫組織化學、原位雜交、Western blot、Southern blot等膜顯色中應用比較廣泛,也可以用于原位檢測細胞或組織內源性的過氧化物酶。
操作步驟
1. 在免疫印跡實驗中,先將相應的HRP標記的二抗覆蓋膜,37℃震蕩器上震蕩1-1.5 Hour,再用TBST或者PBST洗滌膜3~4次,zui后一次用TBS或PBS洗滌膜,將膜轉移到陰暗處。
2. 顯色前先將膜浸泡在10 mL的緩沖液C中10 min,再加入0.5 mL左右的底物溶液A和4μL底物溶液B,充分混勻。
3. 在陰暗處,在37℃的情況下,反應5-30 min,這時蘭色的產物條帶出現。
4. 照像記錄實驗結果。
注意事項
1. 緩沖液C在使用前充分震蕩混勻。
2. 請在使用前按照上述比例配置所需溶液?,F配現用,如果有多余,當顏色變藍時,應該丟棄。
3. 請使用完后,將分析液A、分析液B和緩沖液C的蓋子旋緊,以防止溶液揮發(fā)和與空氣中的成分發(fā)生化學反應。
4. 如果所使用的膜較大,請適當增加所配試劑的量,以便*覆蓋膜。
5. 請正確配制western blot所需要的試劑,正確的膜轉移,抗體的稀釋和沖洗步驟,以保證能夠顯色和減少雜帶的產生。
6. 顯色一般在室外溫或37℃反應10-30 min,再延長反應時間,會使本底值增高,影響實驗結果的分析。
7. 本試劑只能夠用于體外實驗,不能夠用于臨床、治療和動物體內實驗等目的,由此產生的后果概不承擔責任。
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