主要用途

細(xì)胞CDK1/CYCLIN B激酶活性光譜法定量檢測試劑是一種旨在通過多肽底物，受到CDK1/CYCLIN B磷酸化后，進(jìn)而由丙酮酸激酶和乳酸脫氫酶連續(xù)循環(huán)法反應(yīng)系統(tǒng)，測定產(chǎn)生ADP過程中，伴隨的還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）的氧化反應(yīng)， 即采用光譜法測定其氧化后峰值的變化，以分析細(xì)胞裂解樣品中CDK1/CYCLIN B特異活性的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)由大師級(jí)科學(xué)家精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種細(xì)胞裂解萃取液樣品（動(dòng)物、人體）、部分或*純化酶樣品中CDK1/CYCLIN B激酶的特異活性定量檢測，以及抑制劑和激活劑的篩選。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩(wěn)定，高度敏感。

技術(shù)背景

細(xì)胞周期素依賴性激酶1（cyclin dependent kinase 1；CDK1），又稱為細(xì)胞分裂周期蛋白2（cell division cycle2；CDC2）或p34cdk1，屬于絲氨酸/蘇氨酸激酶（serine/threonine protein kinase）家屬成員之一。其為高度進(jìn)化保留的激酶復(fù)合物，成熟促進(jìn)因子（maturation promoting factor；MRF）中的催化亞體，含有297氨基酸，與細(xì)胞周期素B結(jié)合，允許細(xì)胞由G2期進(jìn)入有絲分裂期以及由G1期進(jìn)入DNA合成期，達(dá)到調(diào)節(jié)細(xì)胞生長、DNA復(fù)制、細(xì)胞分裂等。其磷酸化目標(biāo)序列為 GGGRSPGRRRRK?；诘孜颎GGRSPGRRRRK，在ATP的存在下，受到CDK1/CYCLIN B激酶的磷酸化，獲得產(chǎn)物磷酸化多肽，進(jìn)而通過丙酮酸激酶（pyruvate kinase；PK）和乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase；LDH）反應(yīng)系統(tǒng)中，還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（reduced nicotinamide adenine dinucleotide；NADH）轉(zhuǎn)化為氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（nicotinamide adenine dinucleotide；NAD），其吸光峰值的變化（340nm），來定量分析細(xì)胞周期素依賴性激酶1/細(xì)胞周期素B的特異活性。

用戶自備

CDK1/CYCLIN B激酶：用于抑制劑篩選
1.5毫升離心管：用于樣品保存的容器
15毫升錐形離心管：用于樣品處理的容器
細(xì)胞刮脫棒：用于貼壁細(xì)胞脫離
（微型）臺(tái)式離心機(jī)：用于細(xì)胞預(yù)處理
100微升1厘米光徑比色皿或96孔板：用于光度分析操作的容器
分光光度儀或酶標(biāo)儀：用于樣品光度分析

注意事項(xiàng)

1．本產(chǎn)品為25次操作，包括背景操作
2．操作時(shí)，須戴手套
3．系統(tǒng)操作過程中，背景測定只需1次
4．樣品處理忌用磷酸緩沖溶液 
5．樣品須澄清，至關(guān)重要 
6．加入樣品啟動(dòng)反應(yīng)后3秒內(nèi)即刻光譜測定
7．測定值由高到低變化；測定可持續(xù)30分鐘
8．光譜測定后，比色皿須清洗*
9．樣本測定0分鐘讀數(shù)高于5分鐘讀數(shù)表明具有酶活性
10．建議待測樣本蛋白濃度為50微克/5微升（本公司提供 Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒－30030.1） 
11．如果待測樣品濃度過高或過低，可以調(diào)整樣品濃度
12．可以使用CDK1/CYCLIN B抑制劑（CGP74514A）作為抑制劑對照（IC50＝0.025微摩爾）或陰性對照
13．CDK1/CYCLIN B激酶活性單位濃度定義：在30℃溫度下，pH 7.5條件下，每分鐘內(nèi)能夠氧化1微摩爾還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）所需的酶量作為一個(gè)活性單位
14．本公司提供系列蛋白激酶檢測試劑產(chǎn)品
 
質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

1．本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
2．本產(chǎn)品經(jīng)鑒定檢測敏感