細(xì)菌硫化氫含量比色法定量檢測試劑盒

產(chǎn)品說明書

主要用途

細(xì)菌硫化氫含量比色法定量檢測試劑是一種旨在通過醋酸鋅捕獲吸收，溶解后與氯化鐵分子反應(yīng)，測定樣品中黑色的硫化鐵產(chǎn)物，即采用比色法測算硫化氫含量的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。適用于各種細(xì)菌菌株硫化氫含量的檢測。產(chǎn)品即到即用，操作簡捷，性能穩(wěn)定，檢測敏感。

技術(shù)背景

硫（sulfur）是地球上十種zui豐富的元素之一，其氧化還原形式通過硫循環(huán)（sulfur cycle）產(chǎn)生。其中硫化氫（hydrogen sulfide；H2S）是硫循環(huán)中的主要化合物，由微生物，包括細(xì)菌介導(dǎo)的反應(yīng)產(chǎn)物。硫化氫是一種無色異味氣體分子，常作為毒素和工業(yè)污染分子，同時(shí)也是人體的調(diào)節(jié)因子。許多細(xì)菌能夠產(chǎn)生硫化氫，例如普通變形桿菌（Proteus vulgaris）、枸櫞酸桿菌屬（Citrobacter spp）和產(chǎn)氣莢膜梭菌（Clostridium perfringens）等，通過產(chǎn)生半胱氨酸脫硫酶（cysteine desulfurase），與輔酶磷酸吡哆醛（pyridoxyl phosphate）結(jié)合，使半胱氨酸脫氨基化（deamination）， 產(chǎn)生硫化氫。硫化氫定性或定量檢測可以用來鑒定細(xì)菌的生理特征，以及水質(zhì)評價(jià)。基于硫化氫分子，受到醋酸鋅（zinc acetate）捕獲吸收，在二甲基對苯二胺二鹽酸鹽（N,N-dimethyl-p-phenylenediamine）溶液中溶解后，與氯化鐵分子（三價(jià)鐵；ferric）反應(yīng)，生成黑色的硫化鐵（iron sulfide）復(fù)合物，在分光光度儀（670nm 波長）下出現(xiàn)吸光峰值的變化，來定量測定樣品中硫化氫的含量。 

產(chǎn)品內(nèi)容

保存方式

保存在4℃冰箱里；去干擾液（Reagent D）、溶解液（Reagent E）和顯色液（Reagent F）試劑具有腐蝕性，主要操作安全；有效保證6月

用戶自備

15毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器

1.5毫升離心管：用于標(biāo)準(zhǔn)樣品配制和樣品操作的容器

（微型）臺(tái)式離心機(jī)：用于樣品制備

超聲儀：用于樣品制備的儀器

比色皿：用于比色的容器

分光光度儀：用于比色分析

實(shí)驗(yàn)步驟

• 樣品準(zhǔn)備

• 準(zhǔn)備好10毫升待測的細(xì)菌 
• 轉(zhuǎn)移到15毫升錐形離心管
• 放進(jìn)4℃臺(tái)式離心機(jī)離心5分鐘，速度為1000g
• 小心抽去上清液
• 加入500微升裂解液（Reagent A），充分混勻
• 轉(zhuǎn)移到預(yù)冷的1.5毫升離心管
• 在冰槽里，置于200瓦超聲儀下，功率50％，猝擊30秒，重復(fù)3次，期間置于冰槽里冷卻
• 放進(jìn)4℃微型臺(tái)式離心機(jī)離心15分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心移取500微升上清液到新的預(yù)冷的1.5毫升離心管
• 移取10微升進(jìn)行蛋白定量檢測
• 即刻放進(jìn)－70℃保存或置于冰槽里繼續(xù)后續(xù)操作

二、標(biāo)準(zhǔn)樣品配制

• 準(zhǔn)備好上述制備的待測樣品，置于冰槽里備用
• 設(shè)定好分光光度儀：波長670nm，并置零 
• 準(zhǔn)備好5個(gè)1.5毫升離心管，標(biāo)記為1至5號(hào)管
• 分別加入50微升稀釋液（Reagent C）到2至5號(hào)管
• 移取100微升標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent G）到1號(hào)管，混勻
• 小心移取50微升1號(hào)管標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent G）到2號(hào)管，混勻
• 小心移取50微升2號(hào)管稀釋的標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent G）到3號(hào)管，混勻
• 小心移取50微升3號(hào)管稀釋的標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent G）到4號(hào)管，混勻
• 將1至5號(hào)管放進(jìn)冰槽里備用，避免光照；標(biāo)準(zhǔn)管濃度見下表

• 樣品測定

• 設(shè)定好分光光度儀或酶標(biāo)儀：波長670nm，并置零
• 分別移取50微升上述制備的標(biāo)準(zhǔn)樣品或待測樣品到1.5毫升離心管
• 分別加入250微升萃取液（Reagent B）
• 分別加入450微升稀釋液（Reagent C），混勻
• 室溫下孵育10分鐘
• 分別加250微升去干擾液（Reagent D），混勻
• 放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘，速度為10000g
• 分別小心移取800微升上清液到比色皿
• 分別加入100微升溶解液（Reagent E），混勻
• 分別加入100微升顯色液（Reagent F）
• 室溫下孵育20分鐘，避免光照
• 即刻放進(jìn)分光光度儀檢測：獲得吸光讀數(shù)
• 構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線：縱座標(biāo)（Y軸）為吸光讀數(shù)；橫座標(biāo)（X軸）為標(biāo)準(zhǔn)硫化氫濃度（微摩爾/升）
• 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得樣品對應(yīng)硫化氫濃度（微摩爾/升）
• 計(jì)算樣品實(shí)際硫化氫濃度（微摩爾/升）

【根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得樣品對應(yīng)硫化氫濃度（微摩爾/升）×1（體系容量：毫升）×樣品稀釋倍數(shù)】÷0.

05（樣品容量：毫升）

注意事項(xiàng)

• 本產(chǎn)品為25次（20個(gè)樣品）操作，包括標(biāo)準(zhǔn)液
• 操作時(shí)，須戴手套
• 樣品中避免使用DTT等，否則干擾檢測
• 本產(chǎn)品測定理想范圍在0至100微摩爾/升
• 去干擾液（Reagent D）、溶解液（Reagent E）和顯色液（Reagent F）試劑具有腐蝕性，主要操作安全
• 孵育時(shí)，避免光照
• 如果待測樣品濃度過高或過低，可以調(diào)整樣品濃度；注意在計(jì)算實(shí)際濃度時(shí)，不要忘記乘上樣品稀釋倍數(shù)
• 本公司提供系列生化檢測試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定檢測敏感