細(xì)胞黑色素（MELANIN）染色試劑盒產(chǎn)品說明書

主要用途

細(xì)胞黑色素（MELANIN）染色試劑是一種旨在使用銀氨溶液，產(chǎn)生黑色沉淀，以分析細(xì)胞樣品中黑色素成分的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心傳統(tǒng)Masson-Fontana方法、成功實(shí)驗證明的。其適用于各種人體和動物細(xì)胞樣本中的黑色素成分，尤其是腫瘤細(xì)胞的黑色素檢測。產(chǎn)品即到即用，操作簡捷，性能穩(wěn)定，著色清晰。 

技術(shù)背景

黑色素（melanin）是一組棕黑色的沉積色素，不含鐵而含硫，不溶于水和有機(jī)溶劑，能在強(qiáng)堿中長時間后被溶解，被強(qiáng)氧化劑脫色。黑色素與蛋白質(zhì)結(jié)合，形成復(fù)合物，通常存在于皮膚、眼睛和大腦黑質(zhì)（substantia nigra）中。黑色素細(xì)胞（melanocytes）產(chǎn)生黑色素，存儲在細(xì)胞漿的黑色素顆粒中。通過多巴氧化酶（DOPA Oxidase）的作用，使黑色素轉(zhuǎn)化成黑色的多巴黑色素（dopa melanin）。黑色素的顯著增加，與黑色素瘤（melanoma1）有關(guān)。基于黑色素顆粒，在沒有外源性還原劑存在的情況下，具有還原為金屬銀的特點(diǎn)，運(yùn)用這一親銀反應(yīng)（Argentaffin reaction）來檢測細(xì)胞中的黑色素，是銀氨液浸染法（Masson-Fontana）的基本原理。 

產(chǎn)品內(nèi)容

清理液（Reagent A）           毫升

固著液（Reagent B）           毫升

染色液（Reagent C）             毫升

稀釋液（Reagent D）           毫升

平衡液（Reagent E）           毫升

穩(wěn)定液（Reagent F）               毫升

產(chǎn)品說明書              1份

保存方式

保存在4℃冰箱里；染色液（Reagent C）和稀釋液（Reagent D），嚴(yán)格密封瓶口，避免光照；試劑具有腐蝕性，注意操作安全；有效保證6月

用戶自備

中性紅復(fù)染試劑盒（80068）：用于常規(guī)染色后復(fù)染

5毫升玻璃管：用于染色工作液的配制

小型染色缸：用于細(xì)胞染色操作

培養(yǎng)箱：用于染色孵育

光學(xué)顯微鏡：用于細(xì)胞染色后觀察分析

實(shí)驗步驟

操作一：細(xì)胞載玻片染色

一、 樣本固著處理

1． 取出待測的細(xì)胞載玻片  

2． 小心加上xx微升清理液（Reagent A）在載玻片上，鋪滿整個樣品表面

3． 小心移去載玻片上的清理液（Reagent A）

4． 小心加上xx微升固著液（Reagent B）在載玻片上，鋪滿整個樣品表面

5． 室溫下，孵育10分鐘

6． 小心移去載玻片上的固著液（Reagent B）

7． 小心加上xx微升清理液（Reagent A）在載玻片上，清洗樣品表面

8． 小心移去載玻片上的清理液（Reagent A）

9． 重復(fù)實(shí)驗步驟7至8一次

二、樣本染色處理

1． 移取xx毫升染色液（Reagent C）到5毫升玻璃管里

2． 使用xx微升槍頭一滴一滴加入稀釋液（Reagent D），先出現(xiàn)混濁，直至溶液澄清，標(biāo)記為染色工作液

3． 小心加上xx微升上述染色工作液，鋪滿整個載玻片樣品表面

4． 置于45℃培養(yǎng)箱里孵育30分鐘，或直至載玻片呈現(xiàn)深棕色，避免光照

5． 小心移去載玻片上的染色工作液

6． 室溫下，小心將載玻片置入xx毫升清理液（Reagent A）中孵育2分鐘

7． 小心移去載玻片上的清理液（Reagent A）

三、 樣本復(fù)染處理

1． 小心加上xx微升平衡液（Reagent E）在載玻片上，鋪滿整個樣品表面

2． 室溫下，孵育3分鐘

3． 小心移去載玻片上的平衡液（Reagent E）

4． 室溫下，小心將載玻片置入xx毫升清理液（Reagent A）中孵育2分鐘

5． 小心移去載玻片上的清理液（Reagent A）

6． 小心加上xx微升穩(wěn)定液（Reagent F）在載玻片上，鋪滿整個樣品表面

7． 室溫下，孵育2分鐘

8． 小心移去載玻片上的穩(wěn)定液（Reagent F）

9． 室溫下，小心將載玻片置入xx毫升清理液（Reagent A）中孵育2分鐘

10． 小心移去載玻片上的清理液（Reagent A）

11． （選擇步驟）復(fù)染（注意：建議使用中性紅復(fù)染；中性紅復(fù)染試劑盒-80068）

12． 透明處理

13． 放上蓋玻片或封片

14． 即刻在一般光學(xué)顯微鏡下觀察：

黑色素――黑色

細(xì)胞核――紅色（復(fù)染）

操作二：24孔細(xì)胞培養(yǎng)板染色

一、樣本固著處理

1．小心抽去24孔細(xì)胞培養(yǎng)板里的培養(yǎng)液

2．每孔加入xx微升清理液（Reagent A），清洗生長中的細(xì)胞表面

3．小心抽去每孔里的清理液（Reagent A）

4．每孔加入xx微升固著液（Reagent B），覆蓋整個生長表面

5．在室溫下孵育10分鐘

6．小心抽去固著液（Reagent B）

7．每孔加入xx微升清理液（Reagent A），清洗細(xì)胞表面

8．小心抽去清理液（Reagent A）

9．重復(fù)實(shí)驗步驟7和8二次

二、樣本染色處理

1． 移取xx毫升染色液（Reagent C）到5毫升玻璃管里

2． 使用xx微升槍頭一滴一滴加入稀釋液（Reagent D），先出現(xiàn)混濁，直至溶液澄清，標(biāo)記為染色工作液

3． 小心加入xx微升上述染色工作液，覆蓋整個生長表面

4． 置于45℃培養(yǎng)箱里孵育30分鐘，或直至呈現(xiàn)深棕色，避免光照

5． 小心抽去染色工作液

6． 小心加入xx微升清理液（Reagent A），清洗細(xì)胞表面

7． 室溫下孵育2分鐘

8． 小心抽去清理液（Reagent A）

三、 樣本復(fù)染處理

1． 小心加入xx微升平衡液（Reagent E），覆蓋整個生長表面

2． 室溫下，孵育3分鐘

3． 小心抽去平衡液（Reagent E）

4． 小心加入xx微升清理液（Reagent A），清洗細(xì)胞表面

5． 室溫下孵育2分鐘

6． 小心抽去清理液（Reagent A）

7． 小心加入xx微升穩(wěn)定液（Reagent F），覆蓋整個生長表面

8． 室溫下，孵育2分鐘

9． 小心抽去穩(wěn)定液（Reagent F）

10． 小心加入xx微升清理液（Reagent A），清洗細(xì)胞表面

11． 室溫下孵育2分鐘

12． 小心抽去清理液（Reagent A）

13． （選擇步驟）復(fù)染（注意：建議使用中性紅復(fù)染；中性紅復(fù)染試劑盒-80068）

14． 即刻在一般光學(xué)顯微鏡下觀察：

黑色素――黑色

細(xì)胞核――紅色（復(fù)染）

 注意事項

1． 本產(chǎn)品為50次（細(xì)胞載玻片）和25次（1個24孔板）操作

2． 操作時，須戴手套

3． 稀釋液（Reagent D）具有腐蝕性和揮發(fā)性，嚴(yán)格密封瓶口，注意操作安全

4． 加入稀釋液（Reagent D）時，會出現(xiàn)金褐色渾濁沉淀，直至澄清，切莫過度加入；如果過度加入，使用染色液（Reagent C）滴定回來

5． 每次更換試劑溶液時，保持細(xì)胞表面基本晾干。空氣中晾干狀態(tài)為沒有水滴，呈濕潤狀態(tài)，可見反光

6． 試劑溶液在樣品表面時，避免有氣泡存在，同時確保鋪滿細(xì)胞表面

7． 反應(yīng)孵育時間可以延長至1至2小時

8． 樣品染色避免過度，肉眼可見紅色即可終止染色

9． 建議使用中性紅復(fù)染試劑盒（80068），增加染色對比度

10． 細(xì)胞染色完成后，即刻進(jìn)行光學(xué)顯微鏡觀察 

11． 本公司提供系列組織生物化學(xué)成分染色分析試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

1． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定

2． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定顯色清晰