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閱讀:240發(fā)布時間:2017-12-28
不同抗體,即使是同一公司的抗體,其佳的抗體稀釋度也是不一樣的,需要在實驗中摸索。轉(zhuǎn)膜過夜沒有必要,轉(zhuǎn)膜的目是將蛋白轉(zhuǎn)到膜上,不必浪費時間。具體的轉(zhuǎn)膜時間,要根據(jù)目的蛋白分子量的大??;轉(zhuǎn)膜的設備,是半干式,還是濕式。一抗可以過夜,如果想所短Western Blot時間的話,可以增高一抗的孵育溫度,一般37度,兩小時;也可以參照抗體說明書。一抗和二抗得稀釋度,一抗1:1500;二抗1:20000。洗膜時,可以多洗幾次,是在封閉;一抗和二抗后至少是5x5min。
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