半固體瓊脂穿刺法

根據(jù)有鞭毛的細(xì)菌可以在半固體培養(yǎng)基中游動(dòng)卻又不能任意游走的現(xiàn)象，觀察細(xì)菌生長情況，判定試驗(yàn)菌是否有運(yùn)動(dòng)性?？墒褂迷囼?yàn)菌能良好生長的培養(yǎng)基，在其中加0.3%~0.6%的瓊脂，（所用的瓊脂量可因牌號(hào)不同而異）一般半固體培養(yǎng)基應(yīng)是放倒試管不流動(dòng)，而在手上輕輕敲打時(shí)瓊脂即破裂為宜。對(duì)一般常見細(xì)菌可結(jié)合葡萄糖氧化發(fā)酵試驗(yàn)觀察運(yùn)動(dòng)性。

用直針穿刺接種試驗(yàn)菌于半固體培養(yǎng)基內(nèi)，適溫培養(yǎng)。細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)性可用透射光目測(cè)。如生長物只生長在穿刺線上，邊緣十分清晰，則表示試驗(yàn)菌無運(yùn)動(dòng)性；如生長物由穿刺線向四周呈云霧狀擴(kuò)散，其邊緣呈云霧狀，則表示試驗(yàn)菌株有運(yùn)動(dòng)性。對(duì)生長快的細(xì)菌應(yīng)培養(yǎng)1天后觀察。如*天不能判定可在第2?3天再觀察。如2~3天時(shí)仍不能判定是否有運(yùn)動(dòng)性，可延遲5~6天再觀察一次。因?yàn)橛蝿?dòng)力弱的細(xì)菌，在半固體培養(yǎng)基中第1-2天中尚不能從穿刺線游開，故需多培養(yǎng)幾天觀察。如試驗(yàn)菌在半固體培養(yǎng)基中產(chǎn)氣，氣泡會(huì)將穿刺線上的生長物的擴(kuò)散情況，不可誤將不運(yùn)動(dòng)的細(xì)菌判為有運(yùn)動(dòng)性。如試驗(yàn)菌是好氧細(xì)菌，穿刺線上生長物很少，可檢查從培養(yǎng)基表面向下滲入的生長物的情況。

（二）鏡檢法

用顯微鏡檢查細(xì)菌細(xì)胞是否能游動(dòng)，可用普通顯微鏡或相差顯微鏡檢查。用普通顯微鏡時(shí)光線不宜太強(qiáng)，要適當(dāng)減弱。檢查時(shí)應(yīng)注意以下幾點(diǎn)：

(1)細(xì)菌細(xì)胞間有明顯位移者，才能判定為運(yùn)動(dòng)性。由于細(xì)菌細(xì)胞太小，在懸液中有布朗運(yùn)動(dòng)，即每個(gè)細(xì)胞均在原地顫動(dòng)，彼此的位置關(guān)系卻沒改變，切不可將這種現(xiàn)象誤判為具運(yùn)動(dòng)性。由于載片與蓋片之間懸液過多，在使用油浸物鏡調(diào)焦時(shí)，懸液在蓋玻片下流動(dòng)。這時(shí)可看到大批細(xì)菌細(xì)胞都以同一速度向同一方向運(yùn)動(dòng)，這也不是真正的運(yùn)動(dòng)性。真正的運(yùn)動(dòng)性應(yīng)是細(xì)菌細(xì)胞彼此的位置關(guān)系明顯的改變。細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)性因種或菌株而異。有的運(yùn)動(dòng)迅速，有的運(yùn)動(dòng)緩慢。能運(yùn)動(dòng)的菌株也不一定每個(gè)細(xì)胞都同時(shí)運(yùn)動(dòng)，常常是大多數(shù)細(xì)胞不運(yùn)動(dòng)。少數(shù)細(xì)胞明顯運(yùn)動(dòng)。

(2)有些細(xì)胞不以鞭毛運(yùn)動(dòng)，而是滑動(dòng)。鏡檢時(shí)應(yīng)注意與游動(dòng)區(qū)分開。一般游動(dòng)速度高，滑動(dòng)則遲緩。游動(dòng)只能在懸液中運(yùn)動(dòng)，滑行則須附在固體表面進(jìn)行。

(3)如室溫太低，以致載物臺(tái)溫度太低。有的細(xì)菌會(huì)因溫度太低而不能運(yùn)動(dòng)，應(yīng)設(shè)法提高載物臺(tái)或載玻片的溫度，達(dá)到試驗(yàn)菌能運(yùn)動(dòng)的溫度（如在室溫較高的試驗(yàn)室鏡檢，或?qū)⑤d玻片放置保溫箱中一會(huì)兒再觀察）。

(4)鏡檢好氧菌時(shí)，則可能因蓋玻片下供氧不足而使試驗(yàn)菌不能表現(xiàn)出運(yùn)動(dòng)性，遇到這種情況則應(yīng)使蓋玻片下殘留一二個(gè)小氣泡，鏡檢氣泡四周或蓋片邊緣處的細(xì)菌運(yùn)動(dòng)性。

（5）用油鏡檢吋，蓋玻片的厚度以不超過0.17mm為宜。用過厚的蓋玻片時(shí)，調(diào)焦有困難。用相差油鏡觀察時(shí)載玻片的厚度約為1.2mm為宜。