半固體瓊脂穿刺法

根據(jù)有鞭毛的細菌可以在半固體培養(yǎng)基中游動卻又不能任意游走的現(xiàn)象，觀察細菌生長情況，判定試驗菌是否有運動性。可使用試驗菌能良好生長的培養(yǎng)基，在其中加0.3%~0.6%的瓊脂，（所用的瓊脂量可因牌號不同而異）一般半固體培養(yǎng)基應是放倒試管不流動，而在手上輕輕敲打時瓊脂即破裂為宜。對一般常見細菌可結合葡萄糖氧化發(fā)酵試驗觀察運動性。

用直針穿刺接種試驗菌于半固體培養(yǎng)基內，適溫培養(yǎng)。細菌的運動性可用透射光目測。如生長物只生長在穿刺線上，邊緣十分清晰，則表示試驗菌無運動性；如生長物由穿刺線向四周呈云霧狀擴散，其邊緣呈云霧狀，則表示試驗菌株有運動性。對生長快的細菌應培養(yǎng)1天后觀察。如*天不能判定可在第2?3天再觀察。如2~3天時仍不能判定是否有運動性，可延遲5~6天再觀察一次。因為游動力弱的細菌，在半固體培養(yǎng)基中第1-2天中尚不能從穿刺線游開，故需多培養(yǎng)幾天觀察。如試驗菌在半固體培養(yǎng)基中產氣，氣泡會將穿刺線上的生長物的擴散情況，不可誤將不運動的細菌判為有運動性。如試驗菌是好氧細菌，穿刺線上生長物很少，可檢查從培養(yǎng)基表面向下滲入的生長物的情況。

（二）鏡檢法

用顯微鏡檢查細菌細胞是否能游動，可用普通顯微鏡或相差顯微鏡檢查。用普通顯微鏡時光線不宜太強，要適當減弱。檢查時應注意以下幾點：

(1)細菌細胞間有明顯位移者，才能判定為運動性。由于細菌細胞太小，在懸液中有布朗運動，即每個細胞均在原地顫動，彼此的位置關系卻沒改變，切不可將這種現(xiàn)象誤判為具運動性。由于載片與蓋片之間懸液過多，在使用油浸物鏡調焦時，懸液在蓋玻片下流動。這時可看到大批細菌細胞都以同一速度向同一方向運動，這也不是真正的運動性。真正的運動性應是細菌細胞彼此的位置關系明顯的改變。細菌的運動性因種或菌株而異。有的運動迅速，有的運動緩慢。能運動的菌株也不一定每個細胞都同時運動，常常是大多數(shù)細胞不運動。少數(shù)細胞明顯運動。

(2)有些細胞不以鞭毛運動，而是滑動。鏡檢時應注意與游動區(qū)分開。一般游動速度高，滑動則遲緩。游動只能在懸液中運動，滑行則須附在固體表面進行。

(3)如室溫太低，以致載物臺溫度太低。有的細菌會因溫度太低而不能運動，應設法提高載物臺或載玻片的溫度，達到試驗菌能運動的溫度（如在室溫較高的試驗室鏡檢，或將載玻片放置保溫箱中一會兒再觀察）。

(4)鏡檢好氧菌時，則可能因蓋玻片下供氧不足而使試驗菌不能表現(xiàn)出運動性，遇到這種情況則應使蓋玻片下殘留一二個小氣泡，鏡檢氣泡四周或蓋片邊緣處的細菌運動性。

（5）用油鏡檢吋，蓋玻片的厚度以不超過0.17mm為宜。用過厚的蓋玻片時，調焦有困難。用相差油鏡觀察時載玻片的厚度約為1.2mm為宜。