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石蠟切片法實(shí)例(一)
—蘇木精-伊紅對(duì)染法
一、目的要求
1、 熟悉石蠟切片的制作過(guò)程。
2、 掌握HE染色的基本原理和染色方法。
二、實(shí)驗(yàn)原理
石蠟切片是zui基本的切片技術(shù),冰凍切片和超薄切片等都是在石蠟切片基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的。蘇木素與伊紅對(duì)比染色法(簡(jiǎn)稱H.E.對(duì)染法)是組織切片zui常用的染色方法。這種方法適用范圍廣泛,對(duì)組織細(xì)胞的各種成分都可著色,便于全面觀察組織構(gòu)造,而且適用于各種固定液固定的材料,染色后不易褪色可長(zhǎng)期保存。經(jīng)過(guò)HE染色,細(xì)胞核被蘇木素染成藍(lán)紫色,細(xì)胞質(zhì)被伊紅染色呈粉紅色。
三、實(shí)驗(yàn)用品
(一) 器材
切片機(jī),切片刀,溫臺(tái),恒溫箱,*,鑷子,剪刀,解剖針,單面刀片,小臺(tái)木,灑精燈,包埋紙盒,染色缸,燒杯,水盆,熔蠟爐,蠟杯。
(二) 試劑
卡諾(Carnoy)固定液,埃利希蘇木精染液,1%伊紅酒精溶液,1%鹽酸乙醇液,各級(jí)酒精(30%、50%、70%、80%、90%、95%、100%),二甲苯,甘油蛋白粘片劑,中性樹膠。
試劑配法:
1、卡諾氏固定液:
100%酒精3份
冰醋酸 1份
或:100%酒精6份
氯仿 3份
冰醋酸 1份
2、埃利希蘇木精染液的配法:
蘇木精 1g
純酒精 50ml
冰醋酸 5 ml
甘油 50 ml
鉀礬(硫酸鋁鉀)約5g(飽和量)
蒸餾水 50 ml
配法:
ⅰ、將蘇木精溶于約15 ml的純酒精中,再加冰醋酸后攪拌。
ⅱ、當(dāng)蘇木精溶解后即將甘油倒入并搖動(dòng)容器,同時(shí)加入其余的酒精。
ⅲ、將鉀礬在研缽中研碎并加熱,然后將它溶解于水中。
ⅳ、將溫?zé)岬拟浀\溶液一滴一滴地加入上述染液中,并隨時(shí)攪動(dòng)。
ⅴ、此液混合完畢,將瓶口用一層紗布包著小塊棉花塞起來(lái),放在暗處通風(fēng)的地方,并經(jīng)常搖動(dòng)以促進(jìn)它的成熟。成熟時(shí)間約3~4周。若加入0.2g碘酸鈉,可立刻成熟。此液穩(wěn)定而染色均勻,染核效果良好,不會(huì)發(fā)生沉淀,長(zhǎng)期貯備無(wú)妨。此液可分別與伊紅等進(jìn)行二重染色。
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