1 菌片制備

   *ATCC 29213在*大豆瓊脂上36℃±1℃下培養(yǎng)18-24h，將2-3個菌落接種至3ml*大豆肉湯中，在36℃±1℃下培養(yǎng)18-24h。用蛋白胨水1:10稀釋至濃度為1×104CFU/mL~4×104CFU/mL，對zui終菌懸液進行計數(shù)。

   打開無菌袋取出仍貼附在智商的聚氨酯膜，將載菌材料片的可浸濕聚氨酯膜面朝上放在潔凈度盤子上，為了便于操作，用雙面膠帶將載菌材料片的四角固定于盤子上。用培養(yǎng)皿蓋作為模板在載菌膜上化出一個相應的區(qū)域，在該區(qū)域涂布1.0ml*懸浮液，然后將菌片至于56℃干燥大約30min，在干燥期間采用消毒的玻璃涂布器在載菌膜上繼續(xù)涂布菌懸液，以使菌液均勻分布。

   菌片制備好后當日使用。

2 狀態(tài)調節(jié)

   如需要，按照GB6529對試件進行狀態(tài)調節(jié)，也可在標準正常室溫條件下進行狀態(tài)天界和試驗。狀態(tài)調節(jié)的方法應記錄在試驗報告中。

3 試驗設定

   調節(jié)控制桿上配重，使試驗指施加到瓊脂上的力值為3N±0.02N。

   將*個瓊脂培養(yǎng)皿放在轉盤上。

4 材料應用

   用下列計數(shù)：采用一個由內、外環(huán)組成的圓形砝碼，總重800g±1g對材料施加標準的繃緊力。將圓柱放在內環(huán)*，再將試件覆蓋在圓柱體和內環(huán)上，將除去貼附紙后的菌片染菌面向下放在試件上。zui后在聚氨酯膜上覆蓋一層HDPE膜，向下推緊外環(huán)，使三層材料牢固的加在兩個環(huán)之間。

5 試驗

   將上述環(huán)組件輕輕搭放在*個去下蓋子的瓊脂培養(yǎng)皿上，鋼環(huán)自由懸放于旋轉盤的外面，將試驗指置于皿口內測的HDPE膜上，這樣試件可與瓊脂表面接觸。試驗指按上述規(guī)定施加3N壓力，是儀器運行15min。

15min后立即取下環(huán)套件放在一邊。

從旋轉盤上取下*個培養(yǎng)皿并放上皿蓋。馬上將第二個培養(yǎng)皿和環(huán)套件放在旋轉盤上。

對后面的四個培養(yǎng)皿用同一個環(huán)套組件執(zhí)行上述步驟。

五個培養(yǎng)皿完成試驗后，取下菌片并棄去，將試件反轉，上面朝下用HDPE膜覆蓋。

在第六個培養(yǎng)皿上操作15min,即完成*個平行試驗組。

其余4片試件同樣按上述方法各運行六個培養(yǎng)皿各15min，每片試件使用一片新鮮制備的菌片。

如果瓊脂表面聚有液體，將其置于潔凈臺上干燥，將各瓊脂培養(yǎng)皿加蓋置于36℃±1℃培養(yǎng)48h。

計數(shù)每只培養(yǎng)皿中*菌落數(shù)，培養(yǎng)皿中心15min半徑區(qū)域內的菌落數(shù)不計。

如果右一個皿或多個皿的計數(shù)大于750CFU（不包括上述的培養(yǎng)皿中心15min半徑區(qū)域內的菌落數(shù)），可重新驚醒試驗。如果重新試驗仍有一個或多個皿計數(shù)大于750CFU，表明該材料不可能具有足夠的屏障特性，可終止試驗。