一、概述

    PCR又稱聚合酶鏈式反應(Polymerase chain reaction)，是1985年由美國的Kary Mullis*并由美國Cetus公司開發(fā)的一項體外擴增DNA的方法。應用該方法可使極微量的特定DNA片段在幾小時內(nèi)迅速擴增至百萬倍，因而一經(jīng)問世便在短短的數(shù)年內(nèi)就得到了迅速發(fā)晨和實際應用，并在原有基礎上結(jié)合各種生化分子生物學技術衍生出了許多改良技術。這些技術顯示出了巨大的潛力，發(fā)揮著越來越大的作用，也正因為如此它們被譽為20世紀80年代分子生物學革命和生物技術的飛躍。

（一）PCR原理

     PCR是依據(jù)DNA模板的特性，模仿體內(nèi)的復制過程，在體外合適的條件下以單鏈DNA為模板，以人工設計和合成的寡核苷酸為引物，利用熱穩(wěn)定的DNA聚合酶延5’-3’方向摻人單核苷酸來特異性的擴增DNA片段的技術。

（二）PCR反應體系

     PCR反應體系主要由引物、dNTP、DNA聚合酶(TaqDNA聚合酶)、緩沖液、Mg2+和核酸模板組成。

（三）PCR反應參數(shù)

     在PCR反應中每輪循環(huán)的各步反應時間不應過長，以免降低TaqDNA聚合酶的活性。下面介紹PCR反應中的一些具體參數(shù)。

1.變性    

2.退火  

3.延伸  

4.循環(huán)次數(shù)

（四）常見的PCR種類

1.熱啟動PCR    

2.一步單管PCR    

3.多重PCR

4.依賴PCR的DNA指紋圖譜技術  

5.PCR-單鏈構想多態(tài)性分析

6.mRNA差異顯示技術  

7.隨機引物擴增DNA多態(tài)性（RAPD）

8.以微衛(wèi)星DNA介導的PCR技術

9.基因間重復性回文片段（REP）和基因內(nèi)重復性一致序列（ERIC）的擴增

10.擴增片段長度多態(tài)性分析（AFLP）

11.限制性長度多態(tài)性分析（RFLP）

12.用于RNA病毒檢測的核酸擴增技術

（五）PCR技術用于檢測的主要步驟

（1）運用化學手段對目標DNA進行提取。

（2）設計并合成引物，引物設計或合成的好壞直接決定PCR擴增的成效。

（3）進行PCR擴增。

（4）克隆并篩選鑒定PCR產(chǎn)物，將擴增產(chǎn)物進行電泳、染色，在紫外光照射下可見擴增特異區(qū)段的DNA帶．根據(jù)該帶的不同即可鑒定不同的DNA。

（5）DNA序列分析